目的探索草酰乙酸對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用。 方法將60只體重200～250 g 雄性大鼠隨機(jī)分為6組:陰性對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組、草酰乙酸預(yù)處理后心肌缺血-再灌注（OAA）模型組（三個(gè)亞組：高，中，低劑量組）。建立大鼠心肌缺血再灌注模型，造模期間記錄左心室內(nèi)壓（LVSP），左心室內(nèi)壓最大變化速率（±dp/dtmax）以及左心室舒張期末壓力（LVEDP），左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎30 min后實(shí)現(xiàn)再灌注180 min后采血，測(cè)定肌鈣蛋白Ⅰ（cTn-Ⅰ），乳酸脫氫酶（LDH），超氧化物歧化酶（SOD），谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）。取心臟組織，染色，計(jì)算梗死范圍。使用WB 方法檢測(cè)心肌標(biāo)本的NF-E2 相關(guān)因子2（Nrf2）、Kelch 樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白-1（Keap1）及Nrf2 下游的血紅素氧合酶1（HO-1）的表達(dá)。 結(jié)果與假手術(shù)組比較，陰性對(duì)照組各項(xiàng)指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而模型組血清SOD、GSH-Px活力顯著降低（P<0.01），血清LDH、cTn-I含量顯著升高（P<0.01），心肌組織梗死面積顯著升高（P<0.01）；與模型組相比,草酰乙酸預(yù)處理組血清SOD、GSH-Px 活力顯著升高（P<0.05），LDH、cTnI含量顯著降低（P<0.05），心肌組織梗死面積顯著降低（P<0.05），其中高劑量組上述各項(xiàng)指標(biāo)改變更加明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；與模型組相比，OAA預(yù)處理組的Keap1 顯著下調(diào)（P<0.001），總Nrf2 表達(dá)增加，并且Nrf2 的核轉(zhuǎn)移及下游HO-1 表達(dá)顯著上調(diào)（P<0.001），提示草酰乙酸可通過(guò)（至少部分可通過(guò)）Keap1-Nrf2 通路減少缺血再灌注氧化應(yīng)激損傷，減輕心肌損害，起到心肌保護(hù)作用。 結(jié)論草酰乙酸可通過(guò)Keap1-Nrf2 通路減少缺血再灌注氧化應(yīng)激損傷，對(duì)心肌缺血-再灌注損傷具有保護(hù)作用。
目的 檢測(cè)鋅指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在人原發(fā)性肝細(xì)胞癌和癌旁組織中的表達(dá)，比較兩者之間的差異，并探討其與肝細(xì)胞癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系。方法 收集2009年2月至2010年8月期間于華西醫(yī)院肝臟及血管外科行手術(shù)切除的32例原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者的肝癌組織標(biāo)本及對(duì)應(yīng)的癌旁組織26例，行免疫組織化學(xué)染色，同時(shí)收集患者完整的臨床病理學(xué)資料。結(jié)果 鋅指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為87.5%（28/32）、81.3%（26/32）及65.6%（21/32），高于癌旁組織中的61.5%（16/26）、34.6%（9/26）及30.8%（8/26），P＜0.05。鋅指蛋白A20的表達(dá)與乙肝表面抗原（HbsAg）表達(dá)情況及肝硬變情況有關(guān)（P＜0.05）；NF-κB p65蛋白和P-gp蛋白的表達(dá)均與HbsAg表達(dá)情況有關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論 鋅指蛋白A20、NF-κB p65蛋白及P-gp蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞癌組織中均呈高表達(dá)，而在癌旁組織中呈低表達(dá)；3種蛋白可能對(duì)肝臟腫瘤的良惡性判斷起指導(dǎo)作用。
目的 在人工全髖關(guān)節(jié)翻修術(shù)中發(fā)現(xiàn)假體周?chē)罅拷饘匐x子聚集和NF-κB 受體活化因子配體（re ceptor activator of NF-κB ligand，RANKL）表達(dá)的增加，通過(guò)觀察Co2+、Cr3+ 對(duì)小鼠成骨細(xì)胞RANKL、骨保護(hù)素（osteoprotegerin，OPG）表達(dá)的影響，探討金屬離子與假體無(wú)菌性松動(dòng)關(guān)系。 方法 取濃度為1 × 105 個(gè) /mL 體外培養(yǎng)的小鼠成骨細(xì)胞，根據(jù)培養(yǎng)基不同分兩組：實(shí)驗(yàn)組采用含10 mg/L CoCl2 及150 mg/L CrCl3 溶液的培養(yǎng)基；對(duì)照組采用不含金屬離子的培養(yǎng)基。培養(yǎng)24、48 h，采用RT-PCR 和ELISA 法檢測(cè)RANKL、OPG mRNA 及蛋白表達(dá)。 結(jié) 果 RT-PCR 檢測(cè)示培養(yǎng)24、48 h 兩組均見(jiàn)RANKL、OPG mRNA 的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組表達(dá)量較對(duì)照組高，以RANKL 增加顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）；培養(yǎng)24、48 h，實(shí)驗(yàn)組RANKL/OPG mRNA 的比值分別為0.860、1.232，較對(duì)照組0.695、0.688 明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。ELISA 檢測(cè)顯示，實(shí)驗(yàn)組RANKL、OPG 蛋白表達(dá)量較對(duì)照組明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 Co2+、Cr3+ 可刺激小鼠成骨細(xì)胞RANKL、OPG mRNA 的表達(dá)并促進(jìn)其蛋白的分泌，以RANKL 增加顯著，從而促進(jìn)破骨細(xì)胞的形成與活化以及假體無(wú)菌性松動(dòng)的發(fā)生。
目的 觀察人工關(guān)節(jié)磨損產(chǎn)物 Co2+、Cr3+ 刺激下人單核細(xì)胞生物反應(yīng)過(guò)程中TNF-α 的表達(dá)，以及人單核細(xì)胞凋亡與Caspase-3 的變化，探討Co2+、Cr3+ 引發(fā)假體周?chē)侨芙獾淖饔脵C(jī)制。 方法 將CoCl2 粉末與CrCl3 粉末溶于無(wú)菌注射用水，分別配制成濃度為10 mg/L 和500 mg/L 的CoCl2 溶液和CrCl3 溶液。從健康志愿者外周血分離培養(yǎng)單核細(xì)胞，調(diào)整濃度為4 × 106 個(gè)/ 培養(yǎng)皿，根據(jù)培養(yǎng)液不同，分為3 組。A 組生理鹽水作為對(duì)照，B 組CoCl2 溶液，C 組CrCl3 溶液。于培養(yǎng)12、24 及48 h 后吸取細(xì)胞上清液，ELISA 法檢測(cè)TNF-α 含量，TUNEL 檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況，比色法測(cè)定Caspase-3 活性。 結(jié)果 各時(shí)間點(diǎn)B、C 組TNF-α 含量及Caspase-3 活性均高于A 組（P lt; 0. 05），分別于24 h 及48 h達(dá)峰值。各時(shí)間點(diǎn)3 組均存在TUNEL 染色陽(yáng)性細(xì)胞，細(xì)胞核固縮深染，細(xì)胞體積皺縮，胞膜完整。各時(shí)間點(diǎn)B、C 組細(xì)胞凋亡率與A 組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P lt; 0.05）。Caspase-3 活性與細(xì)胞凋亡率成正相關(guān)（r=0.765）。 結(jié)論 Co2+、Cr3+均能刺激人單核細(xì)胞釋放TNF-α 并誘導(dǎo)其凋亡；細(xì)胞凋亡參與了假體周?chē)侨芙獾牟±磉^(guò)程，且可能與Casepase-3的激活有關(guān)。
目的 探討甘草酸二銨（diammonium glycyrrhizinate，DG）對(duì)大鼠脊髓缺血再灌注損傷后NF-κB 的表達(dá)及神經(jīng)元凋亡的影響。 方法 取健康雄性SD 大鼠48 只，體重220 ～ 270 g，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每組24 只。實(shí)驗(yàn)組于缺血開(kāi)始前10 min 舌下靜脈注射DG（20 mg/kg），對(duì)照組注射等量生理鹽水。夾閉左右腎動(dòng)脈之間腹主動(dòng)脈制備脊髓缺血再灌注損傷模型。兩組于缺血再灌注3、24、72、168 h 取腰段脊髓組織，切片，行HE 染色、免疫組織化學(xué)染色觀察及TUNEL 法凋亡細(xì)胞檢測(cè)，并進(jìn)行相關(guān)性分析。 結(jié)果 HE 染色示對(duì)照組缺血再灌注3 h 時(shí)，可見(jiàn)脊髓組織水腫，神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)基本正常；24 h 和72 h 時(shí)組織病理改變進(jìn)一步加重；168 h 時(shí)灰質(zhì)前角中大量空泡形成，尚殘存多個(gè)結(jié)構(gòu)清楚的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)明顯好于對(duì)照組。免疫組織化學(xué)染色示兩組缺血再灌注3 h 表達(dá)NF-κB p65 增強(qiáng)，24 h 達(dá)高峰，隨后緩慢下降。實(shí)驗(yàn)組缺血再灌注各時(shí)間點(diǎn)吸光度（A）值分別為0.306 0 ± 0.024 4、0.396 4 ± 0.022 7、0.296 6 ±0.021 1 和0.267 9 ± 0.015 3；對(duì)照組分別為0.361 1 ± 0.017 7、 0.496 6 ± 0.020 1、 0.356 3 ± 0.021 0 和0.301 4 ± 0.018 1（P lt; 0.05）。DG 對(duì)各時(shí)間點(diǎn)NF-κB p65 表達(dá)的抑制率分別是15.40%、20.17%、19.28% 和11.11%。細(xì)胞凋亡檢測(cè)示兩組于缺血再灌注后神經(jīng)元凋亡表達(dá)增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)A 值分別為0.171 0 ± 0.029 1、0.175 5 ± 0.031 1、0.175 1 ± 0.027 9和0.183 2 ± 0.023 7；對(duì)照組分別為0.236 8 ± 0.063 6、0.241 2 ± 0.042 6、0.201 5 ± 0.049 8 和0.250 1 ± 0.048 4（P lt; 0.05）。DG 各時(shí)間點(diǎn)對(duì)神經(jīng)元凋亡表達(dá)的抑制率分別為27.79%、27.23%、13.08% 和26.74%。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組NF-κB 表達(dá)和神經(jīng)元凋亡表達(dá)成正相關(guān)（r = 0.838，P lt; 0.01）。 結(jié)論 脊髓缺血再灌注可導(dǎo)致NF-κB 表達(dá)及凋亡神經(jīng)元增多，DG 可抑制脊髓神經(jīng)元NF-κB 的表達(dá)，減少神經(jīng)元凋亡。
目的 探討堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 (b FGF)對(duì)人血管內(nèi)皮細(xì)胞 (EC)增生的影響及其機(jī)制 ,明確 b FGF對(duì)煙曲霉素衍生物 (TNP- 4 70 )及地塞米松 (Dex)作用的影響?！》椒ā∨囵B(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 (HU VEC) ,采用 MTT法測(cè)定 EC生長(zhǎng)活性 ,免疫組織化學(xué)方法檢測(cè) EC中核因子 (NF-κB)和 ki- 6 7的表達(dá)?！〗Y(jié)果 b FGF有顯著促進(jìn) EC增生的作用 ,可使核內(nèi) NF-κB和 ki- 6 7表達(dá)增強(qiáng) ;TNP- 4 70及 Dex可抑制 EC增生 ,使核內(nèi) NF-κB和 ki- 6 7表達(dá)減少 ;b FGF逆轉(zhuǎn)二者的抑制效應(yīng)?！〗Y(jié)論 b FGF能促進(jìn) EC增生 ,其機(jī)制可能是通過(guò)激活 NF- κB,使細(xì)胞由靜止期進(jìn)入增殖期 ,促進(jìn) DNA合成 ,細(xì)胞分裂增殖。 TNP- 4 70及 Dex可抑制 NF- κB活化 ,b FGF可逆轉(zhuǎn)二者的抑制效應(yīng)
目的 探討高級(jí)糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞的作用機(jī)制。方法 原代培養(yǎng)人RPE細(xì)胞，在傳代細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好的情況下，無(wú)血清的Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基同步化24 h，進(jìn)行分組：(1) C組：BSA濃度為0.1 g/L，各作用24、48 h，分別為C1、C2組；(2) NC組：葡萄糖濃度為5.6 mmol/L，各作用24、48 h，分別為NC1、NC2組；(3) A組：AGEs濃度分別為0.1、0.2、0.4 g/L，各作用24、48 h，作用24 h依次為A1組、A2組、A3組，作用48 h依次為A4組、A5組、A6組。免疫組織化學(xué)檢測(cè)AGEs受體(RAGE)、過(guò)氧化物酶體增生物激活受體γ輔助激活因子-1α(PGC-1α)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)蛋白的表達(dá)；激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)核因子-κB (NF-κB)的活化。通過(guò)圖像分析軟件IPP6.0和統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 17.0進(jìn)行定量分析。結(jié)果 A組RPE細(xì)胞較C組和NC組RAGE、PGC-1α和VEGF蛋白的表達(dá)明顯增加，且隨著AGEs濃度的升高和刺激時(shí)間的延長(zhǎng)而增加 (F=294.5、228.3、241.5，P＜0.05)；隨著AGEs濃度的升高和刺激時(shí)間的延長(zhǎng)，NF-κB的活化增加。結(jié)論 AGEs的堆積可導(dǎo)致其受體RAGE在RPE細(xì)胞表達(dá)增加，并促進(jìn)核轉(zhuǎn)錄共同激活因子PGC-1α蛋白的表達(dá)和NF-κB的活化，促進(jìn)RPE細(xì)胞VEGF的分泌。
目的 觀察Ras相關(guān)的C3肉毒毒素底物1的小發(fā)夾RNA（Rac1-shRNA）在小鼠氧致視網(wǎng)膜病變中對(duì)視網(wǎng)膜新生血管（RNV）生成的抑制作用及對(duì)活性氧（ROS）-核因子kappa;B（NF-kappa;B）通路的影響。方法 將108只7日齡C57BL/6J小鼠隨機(jī)平均分為3組。其中2組Smith法建立氧致視網(wǎng)膜病變模型；11日齡時(shí)玻璃體腔注射Rac1-shRNA表達(dá)質(zhì)?；驘o(wú)意義質(zhì)粒，分別作為基因干預(yù)組和空白對(duì)照組。第3組于正常氧環(huán)境中飼養(yǎng)，11日齡時(shí)玻璃體腔注射Rac1-shRNA表達(dá)質(zhì)粒作為空白干預(yù)組。15、17日齡時(shí)行熒光視網(wǎng)膜鋪片，觀察視網(wǎng)膜血管發(fā)育及新生血管情況。17日齡時(shí)計(jì)數(shù)眼球切片中突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核數(shù)。17日齡時(shí)進(jìn)行原位雜交法和熒光實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄－聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)小鼠視網(wǎng)膜Rac1和NF-kappa;B p65亞單位的mRNA含量；免疫組織化學(xué)和蛋白質(zhì)免疫印記檢測(cè)Rac1和NF-kappa;B p65的蛋白表達(dá)。結(jié)果 基因干預(yù)組視網(wǎng)膜Rac1的mRNA水平較空白對(duì)照組明顯下調(diào)（t=4.500，P=0.001）。與空白對(duì)照組比較，基因干預(yù)組視網(wǎng)膜鋪片中無(wú)灌注區(qū)、熒光滲漏和新生血管叢明顯減輕，突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核顯著減少（t=6.521，P＜0.001）；視網(wǎng)膜NF-kappa;B p65的核易位水平明顯下降（t=16.008，P＜0.001），同時(shí)mRNA表達(dá)亦明顯下調(diào)（t=3.354，P=0.006），與Rac1 mRNA表達(dá)呈正相關(guān)（t=0.580，P=0.012）。結(jié)論 小鼠玻璃體腔注射脂質(zhì)體包裹的Rac1-shRNA表達(dá)質(zhì)?？捎行С聊暰W(wǎng)膜Rac1基因表達(dá)，阻斷ROS-NF-kappa;B通路而參與抑制相對(duì)缺氧狀態(tài)下RNV生成。
目的 探討核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)及細(xì)胞間粘附分子(ICAM)-1在大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中的表達(dá)及吡咯醛二硫氨基甲酸酯（PDTC）對(duì)兩者表達(dá)的影響。 方法 建立大鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注模型，60只SD大鼠隨機(jī)分為缺血再灌注組和缺血再灌注+PDTC治療組，每組30只大鼠。每只大鼠結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈，右側(cè)未作結(jié)扎作為對(duì)照。每組按再灌注后不同時(shí)間段再分為1、6、12、24、48、72 h組，每組5只大鼠。以原位雜交法檢測(cè)視網(wǎng)膜中NF-κB和ICAM-1的表達(dá)，每只大鼠在1、6、12、24、 48、72 h相應(yīng)時(shí)間段行斷頸處死前均行視網(wǎng)膜電圖（ERG）檢測(cè)，并分別計(jì)算出左眼或右眼E RG a、b波波幅的比值，得出ERG a、b波的相對(duì)恢復(fù)率。 結(jié)果 缺血再灌注組在再灌注后6 h開(kāi)始檢測(cè)到NF-κB和ICAM-1的表達(dá)，在24 h表達(dá)最強(qiáng)，以后逐漸減弱 。缺血再灌注+PDTC組在再灌注后6 h未檢測(cè)到NF-κB和ICAM-1的表達(dá)，在12 h有NF-κB 和ICAM-1的表達(dá)，24 h表達(dá)最強(qiáng)，但低于缺血再灌注組。對(duì)照組未檢測(cè)到NF-κB和ICAM-1的表達(dá)。缺血再灌注各組ERG a、b波波幅相對(duì)恢復(fù)率低于缺血再灌注+PDTC組(P＜0.01 )。缺血再灌注與缺血再灌注+PDTC組各時(shí)間段ERG a、b波波幅相對(duì)恢復(fù)率以再灌注后24 h最差（P＜0.01）。 結(jié)論 NF-κB及其誘導(dǎo)的ICAM-1在視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中發(fā)揮重要作用，PDTC可能通過(guò)抑制NF-κB的活性減輕視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷。 （中華眼底病雜志，2004，20：175-178）
目的 檢測(cè)大鼠視網(wǎng)膜新生血管形成中核因子-κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）的表達(dá)，探討抗氧化劑吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC) 對(duì)視網(wǎng)膜新生血管的抑制作用。 方法 通過(guò)相對(duì)缺氧的方法建立大鼠視網(wǎng)膜新生血管病變模型，用熒光素眼底血管造影(fluorescein fundus angiography, FFA)的方法觀察大鼠視網(wǎng)膜 新生血管；免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)視網(wǎng)膜新生血管大鼠和正常對(duì)照組大鼠NF-κB在視網(wǎng)膜的表達(dá)；視網(wǎng)膜新生血管大鼠腹腔內(nèi)注射PDTC，觀察對(duì)視網(wǎng)膜 NF-κB 表達(dá)以及新生血管形成的影響。 結(jié)果 相對(duì)缺氧組10只大鼠的20只眼中13只眼FFA檢查顯示視網(wǎng)膜中緯部有毛細(xì)血管無(wú)灌注區(qū)、熒光滲漏、新生血管形成，殘存視網(wǎng)膜的大血管均紆曲、擴(kuò)張；3只眼玻璃體積血，無(wú)法檢查眼底。免疫組織化學(xué)染色顯示NF-κB從視網(wǎng)膜內(nèi)核層、神經(jīng)纖維層的膠質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞漿向細(xì)胞核轉(zhuǎn)移。PDTC干預(yù)組10只大鼠的20只眼中2只眼FFA檢查顯示新生血管形成及熒光滲漏；1只眼玻璃體積血；17只眼未見(jiàn)新生血管形成及熒光滲漏。免疫組織化學(xué)染色顯示NF-κB主要在細(xì)胞漿表達(dá)。 結(jié)論 視網(wǎng)膜新生血管的生成與NF-κB的活化密切相關(guān)。PDTC能有效阻止NF-κB的活化以及從視網(wǎng)膜內(nèi)核層、神經(jīng)纖維層的膠質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞漿向細(xì)胞核的轉(zhuǎn)移，抑制視網(wǎng)膜新生血管的形成。 （中華眼底病雜志，2003，19：201-268）