目的:建立兔VX2軟組織腫瘤模型，研究其高頻超聲表現(xiàn)。方法:2006年2～6月在12只大白兔后肢建立軟組織腫瘤模型，行高頻超聲檢查。結(jié)果:12只大白兔成功建立軟組織腫瘤模型，超聲表現(xiàn)為等回聲為主，腫瘤邊緣區(qū)域血供較中央?yún)^(qū)域豐富。結(jié)論:兔軟組織腫瘤模型易于建立，超聲有一定的特征性表現(xiàn)。
目的 觀察以纖維蛋白膠（fibrin sealant，F(xiàn)S ）為載體復(fù)合骨形成蛋白(bone morphogenetic protein, BMP)的注射型骨修復(fù)材料對體外培養(yǎng)的兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞（marrow stromal cells， MSCs）增殖和分化的影響，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 取3日齡新西蘭兔骨髓進(jìn)行培養(yǎng)傳代，采用第3代細(xì)胞進(jìn)行研究。實(shí)驗(yàn)分為3組，實(shí)驗(yàn)組：以含1 μg/ml rhBMP-2注射型FS培養(yǎng)細(xì)胞；FS對照組：以單純FS培養(yǎng)細(xì)胞；空白對照組：不作任何處理。采用細(xì)胞培養(yǎng)、組織化學(xué)及電鏡等方法對各組兔MSCs的增殖、貼壁率、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性及染色、Ⅰ型膠原表達(dá)、超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞在材料中的生長情況進(jìn)行觀察。 結(jié)果 各組細(xì)胞促增殖作用由強(qiáng)到弱依次是：FS對照組→實(shí)驗(yàn)組→空白對照組，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；對細(xì)胞貼壁率的影響總體由強(qiáng)到弱依次是：FS對照組→實(shí)驗(yàn)組→空白對照組，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。各組ALP活性由強(qiáng)到弱依次是：實(shí)驗(yàn)組→FS對照組→空白對照組，各組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）；各組細(xì)胞的Ⅰ型膠原表達(dá)水平由高到低依次是：實(shí)驗(yàn)組→FS對照組→空白對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Plt;0.05）。 掃描電鏡觀察，材料表面粗糙，有微孔存在，F(xiàn)S對照組、實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞與材料融合生長。透射電鏡觀察：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化程度高，但細(xì)胞增殖活性較FS對照組稍差；FS對照組細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的程度較實(shí)驗(yàn)組低，細(xì)胞增殖活性較好；空白對照組的細(xì)胞增殖活性較差，胞外基質(zhì)少。 結(jié)論 以FS為載體復(fù)合BMP的注射型骨修復(fù)材料可顯著提高M(jìn)SCs向成骨細(xì)胞方向的分化水平，但對MSCs促增殖作用不明顯。
目的 檢測重組人骨形成蛋白2（recombinant human bone morphogenetic protein 2, rhBMP-2）與納米羥基磷灰石/膠原/聚乳酸（nano-hydroxyapatite/collagen/ polylactic acid, nHAC/PLA）復(fù)合后形成的活性nHAC/PLA（active nHAC/ PLA, AnHAC/PLA）修復(fù)顱骨極限缺損的效果。方法 新西蘭大白兔48只，體重2.0~2.5 kg。制備直徑為15 mm的顱骨全層缺損模型，隨機(jī)分成4組，每組12只。陽性對照組：缺損區(qū)植入自體髂骨；空白對照組：缺損區(qū)不植入任何材料；陰性對照組：缺損區(qū)植入nHAC/PLA；實(shí)驗(yàn)組：缺損區(qū)植入AnHAC/PLA，每塊AnHAC/PLA上平均吸附rhBMP-21.431 mg。術(shù)后8、16周通過比較顱骨缺損區(qū)X線阻射面積占總?cè)睋p面積百分比、HE染色和Masson’s三色法染色觀察顱骨極限缺損的修復(fù)情況。結(jié)果；術(shù)后8、16周，各組顱骨缺損區(qū)X線阻射程度，陽性對照組分別為67.21%±2.06%、86.48%±1.73%，空白對照組分別為5.84%±1.92%、9.48%±2.72%，陰性對照組分別為19.13%±2.51%、3567%±3.28%，實(shí)驗(yàn)組分別為58.84%±2.55%、85.61%±3.36%。其中除16周實(shí)驗(yàn)組與陽性對照組以及空白對照組8、16周比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)外，其余各組各時(shí)間點(diǎn)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。組織學(xué)觀察顯示,陽性對照組骨缺損區(qū)16周骨小梁較8周增寬，被大量骨組織充填；空白對照組8、16周骨缺損區(qū)均被纖維組織充填，無新骨生成；陰性對照16周骨缺損區(qū)為剩余材料與纖維組織充填，周邊新骨較8周形成增多；實(shí)驗(yàn)組8周材料植入?yún)^(qū)為新生骨替代，16周新生骨呈板層狀，缺損區(qū)材料殘留較少，且周圍可見較多成骨細(xì)胞。結(jié)論 nHAC/PLA是rhBMP-2的良好載體，兩者復(fù)合后制備的AnHAC/PLA具有良好骨形成能力，有望應(yīng)用于臨床上修復(fù)較大型骨缺損。
目的 研究神經(jīng)再生條件液（nerve regeneration conditioned fluid, NRCF）中具有神經(jīng)再生趨化活性的蛋白成分，對相對分子質(zhì)量為(232～440)×103的蛋白條帶進(jìn)一步行分離和定性。方法 新西蘭大白兔6只，體重1.8～2.5 kg，取坐骨神經(jīng)建立神經(jīng)再生室模型。術(shù)后7 d采集NRCF進(jìn)行自然聚丙烯酰胺凝膠電泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis，Native-PAGE)分離，切取相對分子質(zhì)量為(232～440)×103區(qū)域的蛋白條帶，采用Shotgun蛋白質(zhì)組學(xué)策略、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對其組分進(jìn)行定性分析。 結(jié)果 NRCF的Native-PAGE電泳結(jié)果顯示，相對分子質(zhì)量在669×103以上、(232～440)×10.3和(140～232)×103分別有1條蛋白帶，在(67～140)×103有6條蛋白帶。其中相對分子質(zhì)量在(232~440)×103的蛋白條帶共鑒定到54種蛋白質(zhì)，主要集中在等電點(diǎn)5.5～8.0，相對分子質(zhì)量為(10～40)×103范圍內(nèi)，其中4種是未命名蛋白質(zhì)。這54種蛋白質(zhì)可歸類為結(jié)合蛋白（43%）、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（30%）、酶（6%）、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白（4%）和分子功能未知（17%）。54種蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位主要是分泌性蛋白（63%），其他的位于細(xì)胞膜和胞漿內(nèi)等。結(jié)論 采用Native-PAGE和Shotgun蛋白質(zhì)組學(xué)分析NRCF中相關(guān)蛋白質(zhì)，確定了NRCF中相對分子質(zhì)量為(232~440)×103條帶的蛋白質(zhì)組分，為進(jìn)一步研究其中的功能未知蛋白提供了線索，對明確其是否對周圍神經(jīng)再生具有促進(jìn)作用。
目的 了解神經(jīng)再生條件液（never regeneration conditioned fluid，NRCF）中蛋白質(zhì)成分組成及相對分子質(zhì)量為220×103的蛋白帶中是否存在一類新的尚未知的神經(jīng)活性因子。方法 新西蘭大白兔25只，體重1.8～2.5 kg，取坐骨神經(jīng)建立神經(jīng)再生室模型。術(shù)后1周采集NRCF，采用凝膠過濾法分離NRCF中蛋白質(zhì)，主要分離相對分子質(zhì)量為220×103的蛋白帶，應(yīng)用自然聚丙烯酰胺凝膠電泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis，Native-PAGE)法檢測其相對分子質(zhì)量。并對取得的相對分子質(zhì)量為220×103（a峰）和(20～40)×103（c峰）的蛋白帶，分別應(yīng)用已知的神經(jīng)活性因子抗體：抗神經(jīng)生長因子（nerve growth factor， NGF）抗體、抗膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（glial cell-derived neurotrophic factor, GDNF）抗體、抗腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor， BDNF）抗體、抗神經(jīng)營養(yǎng)素3（neurotrophin 3，NT-3）抗體、抗NT-4抗體、抗睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子（ciliang neurotrophic factor,CNTF）抗體，采用Western blot免疫印跡法和ELISA檢測，觀察抗原抗體反應(yīng)。結(jié)果 經(jīng)凝膠過濾法分離的NRCF蛋白質(zhì)，多集中在相對分子質(zhì)量為(20～40)×103和220×103。相對分子質(zhì)量為(20～40)×103蛋白帶中神經(jīng)營養(yǎng)因子與抗NGF、抗BDNF、抗NT-3、抗CNTF等抗體反應(yīng)，相對分子質(zhì)量為220×103的蛋白帶所含神經(jīng)營養(yǎng)因子僅與抗NT-4抗體反應(yīng)。結(jié)論 NRCF中相對分子質(zhì)量為220×103的蛋白帶僅與抗NT-4抗體反應(yīng)，且生物活性遠(yuǎn)強(qiáng)于NT-4，該蛋白帶中可能存在一類新的神經(jīng)活性因子。
目的 研究雪旺細(xì)胞-生物蛋白膠復(fù)合物構(gòu)建組織工程神經(jīng)，修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的效果。方法 取4周齡新西蘭兔瓦勒變性坐骨神經(jīng)，采用組織塊反復(fù)種植培養(yǎng)法培養(yǎng)雪旺細(xì)胞，分離純化，并用S-100蛋白免疫組織化學(xué)染色鑒定。收集已純化的雪旺細(xì)胞，配制成1×106/ml的細(xì)胞懸液，加入生物蛋白膠制成雪旺細(xì)胞生物蛋白膠復(fù)合物，倒置相差顯微鏡觀察雪旺細(xì)胞生長情況。將雪旺細(xì)胞生物蛋白膠復(fù)合物填充于硅膠管（A組）和生物膜（B組）內(nèi)，構(gòu)建組織工程神經(jīng)，分別移植橋接修復(fù)2月齡新西蘭大白兔左側(cè)10 mm脛神經(jīng)缺損(n=8)；C組(n=8)作自體神經(jīng)移植。術(shù)后10周，行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大體觀察、神經(jīng)電生理檢測、移植體大體解剖和組織學(xué)觀察。結(jié)果 所有動(dòng)物均存活至實(shí)驗(yàn)完成。術(shù)后3～4周A組所有動(dòng)物左側(cè)足底均出現(xiàn)潰瘍，B、C組小部分動(dòng)物出現(xiàn)足底潰瘍。10周，神經(jīng)電生理檢測發(fā)現(xiàn)A組所有神經(jīng)移植體未能傳導(dǎo)電刺激；B、C組所有移植體均能傳導(dǎo)電刺激引起腓腸肌的動(dòng)作電位，兩組動(dòng)作電位振幅和神經(jīng)傳導(dǎo)速度分別為4.21±0.82 mV、33.40±5.40 m/s和4.80±1.15 mV、36.55±6.43 m/s，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。A組所有神經(jīng)移植體內(nèi)未見神經(jīng)纖維長入，兩端均有神經(jīng)瘤形成；B、C組無明顯神經(jīng)瘤形成，B組整段神經(jīng)移植體內(nèi)有神經(jīng)纖維長入。組織學(xué)觀察示B、C組再生神經(jīng)的新生軸突形態(tài)無明顯區(qū)別，均接近正常神經(jīng)組織。結(jié)論 用生物膜包裹雪旺細(xì)胞生物蛋白膠復(fù)合物，構(gòu)建組織工程神經(jīng)，能夠促進(jìn)神經(jīng)再生，其修復(fù)效果接近于自體神經(jīng)移植，具有臨床應(yīng)用前景。
目的 利用綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)標(biāo)記技術(shù)，觀察組織工程骨在體內(nèi)形成過程中種子細(xì)胞的變化與轉(zhuǎn)歸。方法 Adeno-XTM-GFP擴(kuò)增和純化后，測定病毒滴度，感染新西蘭大白兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells, MSCs），倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，并在熒光顯微鏡下觀察GFP表達(dá)情況。確認(rèn)標(biāo)記成功后，將其與未標(biāo)記的兔MSCs共同成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)3周后，接種于磷酸鈣骨水泥（calcium phosphate cement，CPC）纖維蛋白膠（fibrin glue，F(xiàn)G）復(fù)合支架材料，構(gòu)建組織工程骨作為實(shí)驗(yàn)組，回植于供體兔皮下。單純CPC-FG復(fù)合支架材料植入對稱部位作為對照。術(shù)后1、2、3周行堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性測定；4周，激光共聚焦顯微鏡下對GFP進(jìn)行示蹤觀察和Ⅰ型膠原、骨鈣素(osteocalcin，OC)免疫組織化學(xué)檢測成骨細(xì)胞功能蛋白，Masson染色觀察新骨形成。結(jié)果 Adeno-XTM-GFP經(jīng)擴(kuò)增和純化后，病毒噬菌斑形成，測得病毒滴度為3×10.8 pfu/ml。Adeno-XTM-GFP感染MSCs后96 h，可見GFP表達(dá)，感染率達(dá)50％～70%，細(xì)胞分裂增殖基本正常。術(shù)后1、2、3周，實(shí)驗(yàn)組ALP活性分別為12.546±1.091、16.567±0.659和20.443±0.706，對照組分別為0.453±0.113、0.243±0.018和0.308±0.056，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。4周，實(shí)驗(yàn)組大體可見組織工程新骨形成，對照組未見新骨形成；組織學(xué)顯示實(shí)驗(yàn)組新生骨小梁圍繞材料孔隙形成，CPCFG復(fù)合支架材料部分降解；實(shí)驗(yàn)組Ⅰ型膠原、OC免疫組織化學(xué)結(jié)果陽性，對照組未見陽性染色；實(shí)驗(yàn)組可見新生組織內(nèi)有GFP標(biāo)記的細(xì)胞。結(jié)論 組織工程骨組織結(jié)構(gòu)與松質(zhì)骨小梁類似，新生組織表達(dá)GFP，提示組織工程骨組織的形成來源于接種的細(xì)胞。
目的 比較碳化二亞胺［l-ethyl-3(3-diaminopropyol)-carbodiimide，EDAC］交聯(lián)脫細(xì)胞牛心包(acellular bovine pericardium，ABP)與膠原膜引導(dǎo)骨再生的作用和膜材料植入動(dòng)物體內(nèi)的轉(zhuǎn)歸。方法 健康雄性成年新西蘭白兔24只，體重2.6～3.5 kg，平均3.1 kg。制備兔雙側(cè)下頜體7 mm×7 mm×5 mm骨缺損模型，一側(cè)骨缺損覆蓋EDAC交聯(lián)ABP（EDAC交聯(lián)ABP組），另一側(cè)覆蓋膠原膜（膠原膜組）。術(shù)后4、8、16及24周各處死6只動(dòng)物行大體、組織學(xué)觀察及圖像分析檢測新生骨面積百分比及膜材料吸收替代百分比。結(jié)果 大體觀察：術(shù)后4、8周EDAC交聯(lián)ABP組膜材料完整，與缺損區(qū)正常骨粘連緊密；膠原膜組膜材料形態(tài)消失，骨缺損區(qū)輪廓欠清晰。術(shù)后16、24周EDAC交聯(lián)ABP組骨缺損區(qū)創(chuàng)面平坦；而膠原膜組凹凸不平。組織學(xué)觀察：術(shù)后4、8周EDAC交聯(lián)ABP組膠原纖維排列規(guī)則，缺損區(qū)中央大量新生骨小梁；膠原膜組膠原纖維斷裂，缺損區(qū)見大量新生骨小梁。術(shù)后16、24周, EDAC交聯(lián)ABP組骨缺損區(qū)形成完整的骨橋,而膠原膜組骨缺損內(nèi)局部長入纖維結(jié)締組織。術(shù)后4、8周，兩組新生骨面積百分比相近，16周EDAC交聯(lián)ABP組為81.99%±3.92%，膠原膜組為76.35%±4.29%，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。術(shù)后4、8、16及24周，EDAC交聯(lián)ABP組膜材料平均吸收替代百分比分別為16.57%、27.94%、65.61%和85.72%；膠原膜組4周降解超過50%，8周已完全降解吸收。結(jié)論 EDAC交聯(lián)脫細(xì)胞牛心包膜材料引導(dǎo)成骨的效率優(yōu)于膠原膜。
目的 探討將編碼細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長因子β1（transfor ming gr owth factor β1，TGF-β1）的重組PGL3-TGF-β1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兔骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（marrow stromal stem cells，MSCs ），體外通過自分泌、誘導(dǎo)作用向軟骨細(xì)胞方向分化的可行性，為基因加強(qiáng)組織工程學(xué)修復(fù) 軟骨損傷提供體外實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 兔MSCs體外密度梯度離心及貼壁篩選法分離培養(yǎng)，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染重組PGL3-TGF-β1，轉(zhuǎn)染后繪制不同時(shí)期細(xì)胞生長曲線，MTT法分析轉(zhuǎn)染后細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)組)生長活性，以未轉(zhuǎn)染空載體細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對照組，未轉(zhuǎn)染細(xì)胞為空白對照組；轉(zhuǎn)染后第2、7天，分別進(jìn)行抗TGF-β1和抗Ⅱ型膠原蛋白的免疫組織化學(xué)染色（SABC法），以未轉(zhuǎn)染細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對照組，PBS作為一抗為空白對照組，進(jìn)行圖像定量分析。 結(jié)果 MSCs體外分離培養(yǎng)，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染后，生長曲線顯示轉(zhuǎn)染后細(xì)胞生長活性較對照組降低，MTT法顯示實(shí)驗(yàn)組及實(shí)驗(yàn)對照組吸光度（A）值較空白對照組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染細(xì)胞第2天，抗TGF-β1免疫組織化學(xué)染色可見細(xì)胞內(nèi)陽性顆粒，實(shí)驗(yàn)對照組及空白對照組均為陰性；轉(zhuǎn)染細(xì)胞第7天，抗Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色實(shí)驗(yàn)組可見細(xì)胞內(nèi)陽性顆粒，實(shí)驗(yàn)對照組及空白對照組均為陰性。圖像分析示，實(shí)驗(yàn)組抗TGF-β1及抗Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色陽性值與實(shí)驗(yàn)對照組及空白對照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。 結(jié)論 脂質(zhì)體法重組PGL3-TGF-β1基因可成功轉(zhuǎn)染兔MSCs，但對細(xì)胞生長有一定影響，轉(zhuǎn)染細(xì)胞表達(dá)TGF-β1，通過其自分泌、誘導(dǎo)作用，細(xì)胞分泌Ⅱ型膠原蛋白，表現(xiàn)出軟骨細(xì)胞樣生理特征，并向軟骨細(xì)胞方向分化。
目的 探討小腸黏膜下層（small intestinal submucosa,SIS）在尿道修復(fù)重建中的應(yīng)用價(jià)值。方法 24只日本雄性大耳白兔，隨機(jī)分為Ａ、Ｂ、Ｃ及Ｄ組(n=6)。Ａ、Ｂ組切除前尿道2.0 cm，A組，用管狀SIS修復(fù)尿道缺損；B組將其斷端與周圍組織直接縫合作為對照。Ｃ、Ｄ組僅切除2.0 cm尿道前壁，保留一半尿道壁為底板，Ｃ組用片狀SIS修復(fù)尿道缺損；Ｄ組將其殘端與周圍組織直接縫合作為對照。均于修復(fù)后6、12周行組織學(xué)觀察；12周行尿道膀胱造影及尿動(dòng)力學(xué)檢查。結(jié)果 術(shù)后6周，A、C組修復(fù)的尿道有單層上皮細(xì)胞覆蓋，基層組織中可見SIS的微小碎片包裹，出現(xiàn)不規(guī)則紊亂的平滑肌細(xì)胞生長，A組較Ｃ組的炎性反應(yīng)重，有白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞浸潤，Ｃ組出現(xiàn)新生血管。術(shù)后12周，Ｃ組的上皮組織及基層下組織與D組無明顯差別，平滑肌排列規(guī)則，血管數(shù)目進(jìn)一步增多，炎性反應(yīng)消失，未見SIS組織；A組中仍可見少數(shù)SIS的微小碎片；Ｂ組1只、Ｄ組２只尿道自行修復(fù)，余可見尿道閉塞，大量結(jié)締組織生長，炎性細(xì)胞浸潤，無正常上皮結(jié)構(gòu)。術(shù)后12周尿道膀胱造影，A、C組可見尿道完整、光滑，無尿液外滲、尿道憩室等形成；尿動(dòng)力學(xué)檢查示A、C組的膀胱容量、最大尿道壓分別與術(shù)前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，而B、D組不能置入測壓管檢測。結(jié)論 SIS可作為兔尿道修復(fù)重建的良好支架材料，片狀SIS修復(fù)優(yōu)于管狀SIS修復(fù)。