目的:建立兔VX2軟組織腫瘤模型，研究其高頻超聲表現(xiàn)。方法:2006年2～6月在12只大白兔后肢建立軟組織腫瘤模型，行高頻超聲檢查。結(jié)果:12只大白兔成功建立軟組織腫瘤模型，超聲表現(xiàn)為等回聲為主，腫瘤邊緣區(qū)域血供較中央?yún)^(qū)域豐富。結(jié)論:兔軟組織腫瘤模型易于建立，超聲有一定的特征性表現(xiàn)。
目的 觀察以纖維蛋白膠（fibrin sealant，F(xiàn)S ）為載體復合骨形成蛋白(bone morphogenetic protein, BMP)的注射型骨修復材料對體外培養(yǎng)的兔骨髓基質(zhì)細胞（marrow stromal cells， MSCs）增殖和分化的影響，為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 方法 取3日齡新西蘭兔骨髓進行培養(yǎng)傳代，采用第3代細胞進行研究。實驗分為3組，實驗組：以含1 μg/ml rhBMP-2注射型FS培養(yǎng)細胞；FS對照組：以單純FS培養(yǎng)細胞；空白對照組：不作任何處理。采用細胞培養(yǎng)、組織化學及電鏡等方法對各組兔MSCs的增殖、貼壁率、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性及染色、Ⅰ型膠原表達、超微結(jié)構(gòu)及細胞在材料中的生長情況進行觀察。 結(jié)果 各組細胞促增殖作用由強到弱依次是：FS對照組→實驗組→空白對照組，各組間差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）；對細胞貼壁率的影響總體由強到弱依次是：FS對照組→實驗組→空白對照組，各組間差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）。各組ALP活性由強到弱依次是：實驗組→FS對照組→空白對照組，各組間差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）；各組細胞的Ⅰ型膠原表達水平由高到低依次是：實驗組→FS對照組→空白對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（Plt;0.05）。 掃描電鏡觀察，材料表面粗糙，有微孔存在，F(xiàn)S對照組、實驗組細胞與材料融合生長。透射電鏡觀察：實驗組細胞向成骨細胞分化程度高，但細胞增殖活性較FS對照組稍差；FS對照組細胞向成骨細胞分化的程度較實驗組低，細胞增殖活性較好；空白對照組的細胞增殖活性較差，胞外基質(zhì)少。 結(jié)論 以FS為載體復合BMP的注射型骨修復材料可顯著提高MSCs向成骨細胞方向的分化水平，但對MSCs促增殖作用不明顯。
目的 檢測重組人骨形成蛋白2（recombinant human bone morphogenetic protein 2, rhBMP-2）與納米羥基磷灰石/膠原/聚乳酸（nano-hydroxyapatite/collagen/ polylactic acid, nHAC/PLA）復合后形成的活性nHAC/PLA（active nHAC/ PLA, AnHAC/PLA）修復顱骨極限缺損的效果。方法 新西蘭大白兔48只，體重2.0~2.5 kg。制備直徑為15 mm的顱骨全層缺損模型，隨機分成4組，每組12只。陽性對照組：缺損區(qū)植入自體髂骨；空白對照組：缺損區(qū)不植入任何材料；陰性對照組：缺損區(qū)植入nHAC/PLA；實驗組：缺損區(qū)植入AnHAC/PLA，每塊AnHAC/PLA上平均吸附rhBMP-21.431 mg。術(shù)后8、16周通過比較顱骨缺損區(qū)X線阻射面積占總?cè)睋p面積百分比、HE染色和Masson’s三色法染色觀察顱骨極限缺損的修復情況。結(jié)果；術(shù)后8、16周，各組顱骨缺損區(qū)X線阻射程度，陽性對照組分別為67.21%±2.06%、86.48%±1.73%，空白對照組分別為5.84%±1.92%、9.48%±2.72%，陰性對照組分別為19.13%±2.51%、3567%±3.28%，實驗組分別為58.84%±2.55%、85.61%±3.36%。其中除16周實驗組與陽性對照組以及空白對照組8、16周比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)外，其余各組各時間點比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。組織學觀察顯示,陽性對照組骨缺損區(qū)16周骨小梁較8周增寬，被大量骨組織充填；空白對照組8、16周骨缺損區(qū)均被纖維組織充填，無新骨生成；陰性對照16周骨缺損區(qū)為剩余材料與纖維組織充填，周邊新骨較8周形成增多；實驗組8周材料植入?yún)^(qū)為新生骨替代，16周新生骨呈板層狀，缺損區(qū)材料殘留較少，且周圍可見較多成骨細胞。結(jié)論 nHAC/PLA是rhBMP-2的良好載體，兩者復合后制備的AnHAC/PLA具有良好骨形成能力，有望應(yīng)用于臨床上修復較大型骨缺損。
目的 研究神經(jīng)再生條件液（nerve regeneration conditioned fluid, NRCF）中具有神經(jīng)再生趨化活性的蛋白成分，對相對分子質(zhì)量為(232～440)×103的蛋白條帶進一步行分離和定性。方法 新西蘭大白兔6只，體重1.8～2.5 kg，取坐骨神經(jīng)建立神經(jīng)再生室模型。術(shù)后7 d采集NRCF進行自然聚丙烯酰胺凝膠電泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis，Native-PAGE)分離，切取相對分子質(zhì)量為(232～440)×103區(qū)域的蛋白條帶，采用Shotgun蛋白質(zhì)組學策略、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對其組分進行定性分析。 結(jié)果 NRCF的Native-PAGE電泳結(jié)果顯示，相對分子質(zhì)量在669×103以上、(232～440)×10.3和(140～232)×103分別有1條蛋白帶，在(67～140)×103有6條蛋白帶。其中相對分子質(zhì)量在(232~440)×103的蛋白條帶共鑒定到54種蛋白質(zhì)，主要集中在等電點5.5～8.0，相對分子質(zhì)量為(10～40)×103范圍內(nèi)，其中4種是未命名蛋白質(zhì)。這54種蛋白質(zhì)可歸類為結(jié)合蛋白（43%）、轉(zhuǎn)運蛋白（30%）、酶（6%）、信號轉(zhuǎn)導蛋白（4%）和分子功能未知（17%）。54種蛋白質(zhì)的亞細胞定位主要是分泌性蛋白（63%），其他的位于細胞膜和胞漿內(nèi)等。結(jié)論 采用Native-PAGE和Shotgun蛋白質(zhì)組學分析NRCF中相關(guān)蛋白質(zhì)，確定了NRCF中相對分子質(zhì)量為(232~440)×103條帶的蛋白質(zhì)組分，為進一步研究其中的功能未知蛋白提供了線索，對明確其是否對周圍神經(jīng)再生具有促進作用。
目的 了解神經(jīng)再生條件液（never regeneration conditioned fluid，NRCF）中蛋白質(zhì)成分組成及相對分子質(zhì)量為220×103的蛋白帶中是否存在一類新的尚未知的神經(jīng)活性因子。方法 新西蘭大白兔25只，體重1.8～2.5 kg，取坐骨神經(jīng)建立神經(jīng)再生室模型。術(shù)后1周采集NRCF，采用凝膠過濾法分離NRCF中蛋白質(zhì)，主要分離相對分子質(zhì)量為220×103的蛋白帶，應(yīng)用自然聚丙烯酰胺凝膠電泳(native-polyacrylamide gel electrophoresis，Native-PAGE)法檢測其相對分子質(zhì)量。并對取得的相對分子質(zhì)量為220×103（a峰）和(20～40)×103（c峰）的蛋白帶，分別應(yīng)用已知的神經(jīng)活性因子抗體：抗神經(jīng)生長因子（nerve growth factor， NGF）抗體、抗膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（glial cell-derived neurotrophic factor, GDNF）抗體、抗腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor， BDNF）抗體、抗神經(jīng)營養(yǎng)素3（neurotrophin 3，NT-3）抗體、抗NT-4抗體、抗睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子（ciliang neurotrophic factor,CNTF）抗體，采用Western blot免疫印跡法和ELISA檢測，觀察抗原抗體反應(yīng)。結(jié)果 經(jīng)凝膠過濾法分離的NRCF蛋白質(zhì)，多集中在相對分子質(zhì)量為(20～40)×103和220×103。相對分子質(zhì)量為(20～40)×103蛋白帶中神經(jīng)營養(yǎng)因子與抗NGF、抗BDNF、抗NT-3、抗CNTF等抗體反應(yīng)，相對分子質(zhì)量為220×103的蛋白帶所含神經(jīng)營養(yǎng)因子僅與抗NT-4抗體反應(yīng)。結(jié)論 NRCF中相對分子質(zhì)量為220×103的蛋白帶僅與抗NT-4抗體反應(yīng)，且生物活性遠強于NT-4，該蛋白帶中可能存在一類新的神經(jīng)活性因子。
目的 研究雪旺細胞-生物蛋白膠復合物構(gòu)建組織工程神經(jīng)，修復周圍神經(jīng)缺損的效果。方法 取4周齡新西蘭兔瓦勒變性坐骨神經(jīng)，采用組織塊反復種植培養(yǎng)法培養(yǎng)雪旺細胞，分離純化，并用S-100蛋白免疫組織化學染色鑒定。收集已純化的雪旺細胞，配制成1×106/ml的細胞懸液，加入生物蛋白膠制成雪旺細胞生物蛋白膠復合物，倒置相差顯微鏡觀察雪旺細胞生長情況。將雪旺細胞生物蛋白膠復合物填充于硅膠管（A組）和生物膜（B組）內(nèi)，構(gòu)建組織工程神經(jīng)，分別移植橋接修復2月齡新西蘭大白兔左側(cè)10 mm脛神經(jīng)缺損(n=8)；C組(n=8)作自體神經(jīng)移植。術(shù)后10周，行實驗動物大體觀察、神經(jīng)電生理檢測、移植體大體解剖和組織學觀察。結(jié)果 所有動物均存活至實驗完成。術(shù)后3～4周A組所有動物左側(cè)足底均出現(xiàn)潰瘍，B、C組小部分動物出現(xiàn)足底潰瘍。10周，神經(jīng)電生理檢測發(fā)現(xiàn)A組所有神經(jīng)移植體未能傳導電刺激；B、C組所有移植體均能傳導電刺激引起腓腸肌的動作電位，兩組動作電位振幅和神經(jīng)傳導速度分別為4.21±0.82 mV、33.40±5.40 m/s和4.80±1.15 mV、36.55±6.43 m/s，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。A組所有神經(jīng)移植體內(nèi)未見神經(jīng)纖維長入，兩端均有神經(jīng)瘤形成；B、C組無明顯神經(jīng)瘤形成，B組整段神經(jīng)移植體內(nèi)有神經(jīng)纖維長入。組織學觀察示B、C組再生神經(jīng)的新生軸突形態(tài)無明顯區(qū)別，均接近正常神經(jīng)組織。結(jié)論 用生物膜包裹雪旺細胞生物蛋白膠復合物，構(gòu)建組織工程神經(jīng)，能夠促進神經(jīng)再生，其修復效果接近于自體神經(jīng)移植，具有臨床應(yīng)用前景。
目的 利用綠色熒光蛋白(green fluorescent protein，GFP)標記技術(shù)，觀察組織工程骨在體內(nèi)形成過程中種子細胞的變化與轉(zhuǎn)歸。方法 Adeno-XTM-GFP擴增和純化后，測定病毒滴度，感染新西蘭大白兔骨髓間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells, MSCs），倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化，并在熒光顯微鏡下觀察GFP表達情況。確認標記成功后，將其與未標記的兔MSCs共同成骨誘導培養(yǎng)3周后，接種于磷酸鈣骨水泥（calcium phosphate cement，CPC）纖維蛋白膠（fibrin glue，F(xiàn)G）復合支架材料，構(gòu)建組織工程骨作為實驗組，回植于供體兔皮下。單純CPC-FG復合支架材料植入對稱部位作為對照。術(shù)后1、2、3周行堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性測定；4周，激光共聚焦顯微鏡下對GFP進行示蹤觀察和Ⅰ型膠原、骨鈣素(osteocalcin，OC)免疫組織化學檢測成骨細胞功能蛋白，Masson染色觀察新骨形成。結(jié)果 Adeno-XTM-GFP經(jīng)擴增和純化后，病毒噬菌斑形成，測得病毒滴度為3×10.8 pfu/ml。Adeno-XTM-GFP感染MSCs后96 h，可見GFP表達，感染率達50％～70%，細胞分裂增殖基本正常。術(shù)后1、2、3周，實驗組ALP活性分別為12.546±1.091、16.567±0.659和20.443±0.706，對照組分別為0.453±0.113、0.243±0.018和0.308±0.056，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。4周，實驗組大體可見組織工程新骨形成，對照組未見新骨形成；組織學顯示實驗組新生骨小梁圍繞材料孔隙形成，CPCFG復合支架材料部分降解；實驗組Ⅰ型膠原、OC免疫組織化學結(jié)果陽性，對照組未見陽性染色；實驗組可見新生組織內(nèi)有GFP標記的細胞。結(jié)論 組織工程骨組織結(jié)構(gòu)與松質(zhì)骨小梁類似，新生組織表達GFP，提示組織工程骨組織的形成來源于接種的細胞。
目的 比較碳化二亞胺［l-ethyl-3(3-diaminopropyol)-carbodiimide，EDAC］交聯(lián)脫細胞牛心包(acellular bovine pericardium，ABP)與膠原膜引導骨再生的作用和膜材料植入動物體內(nèi)的轉(zhuǎn)歸。方法 健康雄性成年新西蘭白兔24只，體重2.6～3.5 kg，平均3.1 kg。制備兔雙側(cè)下頜體7 mm×7 mm×5 mm骨缺損模型，一側(cè)骨缺損覆蓋EDAC交聯(lián)ABP（EDAC交聯(lián)ABP組），另一側(cè)覆蓋膠原膜（膠原膜組）。術(shù)后4、8、16及24周各處死6只動物行大體、組織學觀察及圖像分析檢測新生骨面積百分比及膜材料吸收替代百分比。結(jié)果 大體觀察：術(shù)后4、8周EDAC交聯(lián)ABP組膜材料完整，與缺損區(qū)正常骨粘連緊密；膠原膜組膜材料形態(tài)消失，骨缺損區(qū)輪廓欠清晰。術(shù)后16、24周EDAC交聯(lián)ABP組骨缺損區(qū)創(chuàng)面平坦；而膠原膜組凹凸不平。組織學觀察：術(shù)后4、8周EDAC交聯(lián)ABP組膠原纖維排列規(guī)則，缺損區(qū)中央大量新生骨小梁；膠原膜組膠原纖維斷裂，缺損區(qū)見大量新生骨小梁。術(shù)后16、24周, EDAC交聯(lián)ABP組骨缺損區(qū)形成完整的骨橋,而膠原膜組骨缺損內(nèi)局部長入纖維結(jié)締組織。術(shù)后4、8周，兩組新生骨面積百分比相近，16周EDAC交聯(lián)ABP組為81.99%±3.92%，膠原膜組為76.35%±4.29%，組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。術(shù)后4、8、16及24周，EDAC交聯(lián)ABP組膜材料平均吸收替代百分比分別為16.57%、27.94%、65.61%和85.72%；膠原膜組4周降解超過50%，8周已完全降解吸收。結(jié)論 EDAC交聯(lián)脫細胞牛心包膜材料引導成骨的效率優(yōu)于膠原膜。
目的 探討將編碼細胞轉(zhuǎn)化生長因子β1（transfor ming gr owth factor β1，TGF-β1）的重組PGL3-TGF-β1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染兔骨髓基質(zhì)干細胞（marrow stromal stem cells，MSCs ），體外通過自分泌、誘導作用向軟骨細胞方向分化的可行性，為基因加強組織工程學修復 軟骨損傷提供體外實驗依據(jù)。 方法 兔MSCs體外密度梯度離心及貼壁篩選法分離培養(yǎng)，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染重組PGL3-TGF-β1，轉(zhuǎn)染后繪制不同時期細胞生長曲線，MTT法分析轉(zhuǎn)染后細胞(實驗組)生長活性，以未轉(zhuǎn)染空載體細胞為實驗對照組，未轉(zhuǎn)染細胞為空白對照組；轉(zhuǎn)染后第2、7天，分別進行抗TGF-β1和抗Ⅱ型膠原蛋白的免疫組織化學染色（SABC法），以未轉(zhuǎn)染細胞為實驗對照組，PBS作為一抗為空白對照組，進行圖像定量分析。 結(jié)果 MSCs體外分離培養(yǎng)，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染后，生長曲線顯示轉(zhuǎn)染后細胞生長活性較對照組降低，MTT法顯示實驗組及實驗對照組吸光度（A）值較空白對照組低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；實驗組轉(zhuǎn)染細胞第2天，抗TGF-β1免疫組織化學染色可見細胞內(nèi)陽性顆粒，實驗對照組及空白對照組均為陰性；轉(zhuǎn)染細胞第7天，抗Ⅱ型膠原免疫組織化學染色實驗組可見細胞內(nèi)陽性顆粒，實驗對照組及空白對照組均為陰性。圖像分析示，實驗組抗TGF-β1及抗Ⅱ型膠原免疫組織化學染色陽性值與實驗對照組及空白對照組相比，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。 結(jié)論 脂質(zhì)體法重組PGL3-TGF-β1基因可成功轉(zhuǎn)染兔MSCs，但對細胞生長有一定影響，轉(zhuǎn)染細胞表達TGF-β1，通過其自分泌、誘導作用，細胞分泌Ⅱ型膠原蛋白，表現(xiàn)出軟骨細胞樣生理特征，并向軟骨細胞方向分化。
目的 探討小腸黏膜下層（small intestinal submucosa,SIS）在尿道修復重建中的應(yīng)用價值。方法 24只日本雄性大耳白兔，隨機分為Ａ、Ｂ、Ｃ及Ｄ組(n=6)。Ａ、Ｂ組切除前尿道2.0 cm，A組，用管狀SIS修復尿道缺損；B組將其斷端與周圍組織直接縫合作為對照。Ｃ、Ｄ組僅切除2.0 cm尿道前壁，保留一半尿道壁為底板，Ｃ組用片狀SIS修復尿道缺損；Ｄ組將其殘端與周圍組織直接縫合作為對照。均于修復后6、12周行組織學觀察；12周行尿道膀胱造影及尿動力學檢查。結(jié)果 術(shù)后6周，A、C組修復的尿道有單層上皮細胞覆蓋，基層組織中可見SIS的微小碎片包裹，出現(xiàn)不規(guī)則紊亂的平滑肌細胞生長，A組較Ｃ組的炎性反應(yīng)重，有白細胞及淋巴細胞浸潤，Ｃ組出現(xiàn)新生血管。術(shù)后12周，Ｃ組的上皮組織及基層下組織與D組無明顯差別，平滑肌排列規(guī)則，血管數(shù)目進一步增多，炎性反應(yīng)消失，未見SIS組織；A組中仍可見少數(shù)SIS的微小碎片；Ｂ組1只、Ｄ組２只尿道自行修復，余可見尿道閉塞，大量結(jié)締組織生長，炎性細胞浸潤，無正常上皮結(jié)構(gòu)。術(shù)后12周尿道膀胱造影，A、C組可見尿道完整、光滑，無尿液外滲、尿道憩室等形成；尿動力學檢查示A、C組的膀胱容量、最大尿道壓分別與術(shù)前比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，而B、D組不能置入測壓管檢測。結(jié)論 SIS可作為兔尿道修復重建的良好支架材料，片狀SIS修復優(yōu)于管狀SIS修復。