虹膜色素上皮（IPE）細胞是一種胚胎發(fā)育與視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）細胞同源的生長細胞，不僅在結(jié)構(gòu)上與RPE細胞有著驚人的相似之處，而且在吞噬視桿細胞外節(jié)段和分泌細胞因子等功能方面也有顯著一致性。利用基因轉(zhuǎn)染等方法將IPE細胞移植到視網(wǎng)膜下腔不僅可以應用于遺傳性視網(wǎng)膜變性，老年性相關變性等眼科疾病的治療，同時還可以應用于神經(jīng)退行性疾病的治療。關注IPE細胞的功能特性及其移植方法的研究現(xiàn)狀和應用前景具有重要的臨床意義?，F(xiàn)就IPE細胞的功能特性及研究進展作一綜述。
目的 觀察高糖缺氧環(huán)境下轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)對人視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞(hREC)的影響。 方法 分別于5.5 mmol/L葡萄糖(低糖，LG)、25.0 mmol/L葡萄糖(高糖，HG)以及200 μmol/L CoCl2誘導的缺氧環(huán)境中培養(yǎng)hREC、人視網(wǎng)膜色素上皮細胞(hRPEC)，并據(jù)此分為LG組、LG缺氧組、HG組、HG缺氧組。實時無標記細胞功能分析儀檢測細胞培養(yǎng)初始時間(0 h)及培養(yǎng)后4、8、16、24、36、48、60、72 h的細胞生長指數(shù)。分別在LG組、LG缺氧組、HG組、HG缺氧組細胞培養(yǎng)基中添加4 μmol/L TTR，即LG組+TTR、LG缺氧組+TTR、HG組+TTR、HG缺氧組+TTR，觀察TTR對hREC和hRPEC的作用以及hRPEC對hREC生長的影響。Transwell共培養(yǎng)體系觀察hPEPC對hREC生長影響。 結(jié)果 培養(yǎng)后72 h， LG組hREC、hRPEC生長指數(shù)明顯高于LG缺氧組、HG組，差異均有統(tǒng)計學意義(hREC：F=17.098、22.970, P＜0.05； hRPEC： F=45.442、9.011, P＜0.05)；HG組、HG缺氧組hREC、hRPEC生長指數(shù)顯著降低，差異均有統(tǒng)計學意義(hREC：F=146.184,P＜0.05；hRPEC：F=27.907,P＜0.05)。HG組+TTR、 HG缺氧組+TTR hREC生長指數(shù)顯著低于HG組、HG缺氧組，兩組hREC生長指數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學意義(F=161.430、24.106,P＜0.05)； LG組+TTR、LG缺氧組+TTR hREC生長指數(shù)高于LG組，LG缺氧組，兩組hREC生長指數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學意義(F=200.486、48.662, P＜0.05)。LG組+TTR、LG缺氧組+TTR、HG組+TTR、HG缺氧組+TTR hRPEC生長指數(shù)均較LG組、LG缺氧組、HG組、HG缺氧組略高，但差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。共培養(yǎng)與單獨生長細胞相比，共培養(yǎng)hRPEC對hREC生長有顯著抑制作用，差異有統(tǒng)計學意義(LG組：F=15.711,P＜0.05；LG缺氧組：F=45.659, P＜0.05；HG組：F=7.857, P＜0.05； HG缺氧組：F=6.348,P＜0.05)。 結(jié)論 高糖缺氧環(huán)境下TTR對hREC生長有抑制作用。
視網(wǎng)膜微血管功能失調(diào)、炎癥反應過度激活以及神經(jīng)元的退行性病變是糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）的主要發(fā)病機制。環(huán)狀RNA（circRNA）是一類主要由前體RNA經(jīng)剪切加工后具有特殊環(huán)狀結(jié)構(gòu)的內(nèi)源性非編碼RNA，其廣泛存在于視網(wǎng)膜中并參與各種眼底疾病的發(fā)生發(fā)展。已有研究表明，circRNA在DR視網(wǎng)膜組織中存在異常表達，并且其可作為miRNA的“海綿”，通過參與視網(wǎng)膜微血管功能失調(diào)、炎癥反應及神經(jīng)元退行性病變過程影響DR的發(fā)生發(fā)展。未來，對circRNA在DR中的探索將深入闡明DR的病理生理過程，使其有望成為DR診斷的生物標志物及治療的分子靶點，從而實現(xiàn)DR早期診斷及精準治療的目標。
目的觀察轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)對視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞(RMVEC)生物學行為的影響。 方法培養(yǎng)的RMVEC依照TTR濃度不同分為0(初始濃度)、4 μmol/L組。培養(yǎng)48 h后,噻唑藍(MTT)比色法、細胞遷移實驗分別檢測不同濃度TTR對RMVEC增生、遷移的影響。細胞劃痕實驗檢測培養(yǎng)0(初始時間)、24、48 h時細胞損傷愈合情況。 結(jié)果MMT比色法檢測結(jié)果顯示,初始濃度組、4 μmol/L組吸光度值分別為0.17±0.02、0.40±0.03。兩組A值比較,差異有統(tǒng)計學意義(t=15.47,P=0.000 1)。 細胞遷移實驗結(jié)果顯示,初始濃度組、4 μmol/L組RMVEC向外遷移數(shù)分別為(140±7)、(227±14)個。兩組間RMVEC向外遷移數(shù)比較,差異有統(tǒng)計學意義(t=5.44,P=0.000 6)。 細胞劃痕實驗結(jié)果顯示,初始時間各組細胞劃痕距離大致相等;24 h,初始濃度組、4 μmol/L組細胞劃痕愈合距離分別為(134.4±45.4)、(330.0±23.1) μm。兩組細胞劃痕愈合距離比較,差異有統(tǒng)計學意義(t=8.25,P<0.01)。48 h,4 μmol/L組完全愈合,初始濃度組未愈合。 結(jié)論TTR對RMVEC增生、遷移和損傷愈合有明顯促進作用。
目的 觀察轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)在高度近視患者血清及玻璃體中的異常表達。方法 經(jīng)檢影驗光、裂隙燈顯微鏡和間接檢眼鏡眼底檢查，Iol-Master測量眼軸后確診的116例高度近視患者（患者組）納入研究。其中，男性50例，女性66例；平均年齡（49.7plusmn;12.3）歲，平均屈光度（-10plusmn;4.2） D。選取同期健康檢查者86名為正常對照組。其中，男性42名，女性44名；平均年齡（48.5plusmn;10.5）歲。根據(jù)間接檢眼鏡及光相干斷層掃描（OCT）檢察結(jié)果，將眼底病變分為黃斑中心凹脫離、黃斑裂孔、脈絡膜新生血管、黃斑表面膜、瘢痕萎縮、眼底未見明顯病理改變等情況。所有受試者抽取外周靜脈血2 ml，制備血清樣本。另外選擇合并黃斑中心凹脫離、黃斑裂孔的高度近視患者20例20只眼，行玻璃體切割手術前采集玻璃體樣本?；颊呓M、正常對照組各選取16份血清樣本進行線性離子阱質(zhì)譜（LTQ-MASS）分析。并采用蛋白免疫印跡(Western blot)及酶聯(lián)接免疫吸附測定（ELISA）方法對患者組100份血清和正常組80份血清中TTR含量進行測定。再對玻璃體樣本20份和對應血清樣本進行ELISA檢測，同時觀察手術后視力與玻璃體中TTR含量之間的關系。結(jié)果 患者組和正常對照組血清樣本LTQMASS檢測出4種差異蛋白。其中，患者組TTR含量較正常對照組TTR含量明顯升高。Western blot檢測結(jié)果顯示，患者組血清中TTR表達較正常對照組血清TTR表達明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義（t=3.68, P＜0.05）。ELISA檢測結(jié)果顯示，患者組中伴黃斑脫離及黃斑裂孔者血清和玻璃體中TTR含量明顯高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義（F=9.28，P＜0.01）。手術后視力恢復較好者玻璃體中TTR含量較高。結(jié)論 TTR在高度近視患者血清及玻璃體中表達較正常組明顯增高，且與高度近視眼底表現(xiàn)相關。
目的 觀察二十二碳六烯酸（DHA）對視網(wǎng)膜動脈平滑肌細胞（RASMCs）大電導鈣激活鉀離子（BK）通道的激活作用。 方法 傳代培養(yǎng)RASMCs，取第6～8代細胞用于膜片鉗實驗。采用膜內(nèi)向外型單通道膜片鉗實驗技術，分別記錄DHA濃度0.0、1.0、3.0、5.0、7.5、10.0 μmol/L作用下RASMCs的BK通道開放概率（NP0）。以0.0、1.0、5.0 μmol/L不同濃度的DHA干預RASMCs，并以此分為對照組、低劑量組及高劑量組。采用蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測RAMSCs的BK通道中β1亞基的相對蛋白表達量。 結(jié)果 DHA濃度為0.0、1.0、3.0、5.0、7.5、10.0 μmol/L時，RASMCs的BK通道NP0分別為0.044 4±0.001 2、0.081 2±0.004 2、0.209 0±0.006 1、0.310 5±0.005 3、0.465 0±0.007 8、0.497 7±0.014 5。隨DHA濃度的升高，BK通道NP0增加。不同DHA濃度作用下RASMCs的BK通道NP0比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=2.621，P＜0.05）。Western blot檢測結(jié)果顯示，對照組、低劑量組、高劑量組RASMCs的BK通道中β1亞基的相對蛋白表達量比較，差異無統(tǒng)計學意義（F=11.657，P＞0.05）。 結(jié)論 DHA可直接激活RASMCs的BK通道。
目的觀察探討糖尿病視網(wǎng)膜病變（DR）患者血漿中miR-1470的表達變化及可能機制。方法住院治療的30例DR患者（DR組）以及在眼科門診檢查的30例糖尿病患者（DM組）、30名正常健康者（正常組）納入研究。抽取三組受檢者靜脈血5 ml，提取血漿總RNA，純化。通過基因芯片篩選出在DR患者血漿中具有差異表達的miRNA，并采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）驗證基因芯片檢測結(jié)果。采用生物信息學預測miRNA調(diào)控的潛在靶基因，篩選出miR-1470及其靶基因表皮生長因子受體（EGFR）。將人視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞（hREC）分為正常組（糖濃度5.5 mmol/L）、高糖組（糖濃度25.0 mmol/L）。將hREC轉(zhuǎn)染miR-1470模擬物建立miR-1470高表達細胞模型，并將其分為空白對照組、高表達組、陰性對照組。采用RT-PCR檢測細胞中miR-1470表達；采用蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測細胞中EGFR蛋白表達。兩組間計量資料比較采用獨立樣本t檢驗，多組間計量資料比較采用方差分析, 組間計量資料兩兩比較采用多重比較。結(jié)果RT-PCR驗證結(jié)果與基因芯片檢測結(jié)果相符。DR組、DM組及正常組受檢者血漿中miR-1470表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=63.486，P=0.049）。與DM組和正常組比較，DR組患者血漿中miR-1470表達明顯減弱，差異有統(tǒng)計學意義（q=111.2、73.9，P＜0.05）。高糖組hREC中miR-1470表達明顯低于正常組，差異有統(tǒng)計學意義（t=42.082，P=0.015）。高糖組hREC中EGFR蛋白表達明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計學意義（t=?39.939，P=0.016）?？瞻讓φ战M、陰性對照組、高表達組hREC中miR-1470表達（F=637.069，P=0.000）、EGFR蛋白表達比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=122.908，P=0.000）。與空白對照組、陰性對照組比較，高表達組hREC中miR-1470表達明顯升高（q=329.7、328.8，P＜0.05），EGFR蛋白表達明顯降低（q=242.5、234.6，P＜0.05），差異均有統(tǒng)計學意義。陰性對照組與空白對照組hREC中miR-1470表達、EGFR蛋白表達比較，差異無統(tǒng)計學意義（q=1.5、7.9，P＞0.05）。結(jié)論DR患者血漿中miR-1470表達明顯下調(diào)，EGFR表達增加可能與其有關。
目的觀察糖尿病(DM)大鼠視網(wǎng)膜動脈平滑肌細胞(RVSMCs)大電導鈣離子激活鉀離子(BK)通道開放概率及其亞基蛋白表達。 方法8~12周齡健康雄性Spraque-Dawley大鼠50只隨機分為正常對照組、DM模型組, 分別為10、40只。DM模型組大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素建立DM模型, 正常對照組大鼠腹腔注射等劑量0.9%生理鹽水作為對照。采用酶消化法分離大鼠RVSMCs。應用膜片鉗實驗技術記錄兩組大鼠RVSMCs的BK通道電流特征, 計算總開放概率(NP0)。采用蛋白免疫印跡法測定兩組大鼠RVSMCs的BK通道亞基蛋白表達。 結(jié)果與正常對照組比較, DM模型組大鼠RVSMCs的BK通道NP0明顯增高, 差異有統(tǒng)計學意義(t=4.260, P＜0.05)。與正常對照組比較, DM模型組大鼠RVSMCs的BK通道α亞基蛋白表達無明顯變化, 差異無統(tǒng)計學意義(t=10.126, P＞0.05);β1亞基蛋白表達明顯升高, 差異有統(tǒng)計學意義(t=5.146, P＜0.05)。 結(jié)論DM大鼠RVSMCs的BK通道NP0增加, β1亞基蛋白表達升高。
目的 觀察不同分期糖尿病（DM）視網(wǎng)膜病變（DR）患者血清轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白（TTR）的濃度。 方法 2型DM患者176例納入研究。其中，男性104例，女性72例。年齡21～74歲，平均年齡（56±11）歲。DM病程1～30年，平均DM病程（10±7）年。糖化血紅蛋白（HbA1C）5.2%～14.1%，平均HbA1C（8.6±2.0）%。確診為高血壓病76例，高脂血癥72例。應用胰島素114例。無DR 118例，占67.0%；DR 58例，占33.0%。DR患者中，Ⅰ期10例，占5.7%；Ⅱ期26例，占14.8%；Ⅲ期8例，占4.5%；Ⅳ期14例，占8.0%。采集患者肘靜脈血3 ml，人TTR酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒檢測患者血清TTR濃度。對比分析不同分期DR患者血清TTR濃度差異。采用Bivariate法分析TTR濃度與DR、DM病程、高血壓病、高脂血癥、胰島素應用的相關性。 結(jié)果 無DR及Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者血清TTR濃度分別為（224.96±65.47）、（383.68±102.99）、（247.44±63.21）、（228.20±45.89）、（189.34±70.12）mg/L。不同分期DR患者血清TTR濃度比較，差異有統(tǒng)計學意義（F=14.690，P＜0.001）。相關性分析結(jié)果顯示，血清TTR濃度與DR有相關性（r=0.179，P=0.017）；與DM病程（r=–0.027，P=0.727）、高血壓?。╮=0.018，P=0.810）、高脂血癥（r=0.101，P=0.182）、胰島素應用（r=?0.032，P=0.675）均無相關性。 結(jié)論 DRⅠ期患者血清TTR濃度明顯升高；隨DR進展，血清TTR濃度逐漸降低。TTR濃度與DR有相關性。
目的 調(diào)查無錫市濱湖區(qū)50歲及以上人群中糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)的患病情況，分析其影響因素。方法 2010年1～12月采用分層整群隨機抽樣的方法，對50歲及以上人群進行DR普查。對所有受檢者均進行詳細的病史詢問、全身檢查，視力、裂隙燈顯微鏡、直接檢眼鏡檢查和血樣采集。DR診斷標準參照2002年國際DR分型標準。單眼或雙眼DR均入選為DR患者。采用χ2檢驗統(tǒng)計分析與患病率相關的影響因素，通過逐步回歸分析篩選出獨立影響因素。結(jié)果 實際受檢者6150人，受檢率91.5%。檢出糖尿病患者703例。除外屈光間質(zhì)混濁無法記錄眼底情況者40例，納入分析663例。確診DR 36例，占糖尿病患者的5.4%。非增生型DR 34例，占DM患者的5.1%；增生型DR 2例，占DM患者的0.3%。糖尿病病程（r=0.008）、空腹血糖（r=0.009）為影響DR患病率的獨立因素（P＜0.05）。結(jié)論 無錫市濱湖區(qū)50周歲及以上人群DR患病率較低，糖尿病病程和空腹血糖是影響DR患病率的獨立因素。