目的 異氟醚預(yù)處理能對大鼠腎臟發(fā)揮急性期缺血保護作用，但急性期保護作用僅能維持2 ～ 3 h。探討異氟醚延遲性預(yù)處理是否能減輕腎臟缺血再灌注損傷，以及缺氧誘導(dǎo)因子1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）是否參與調(diào)節(jié)該保護作用。 方法 取雄性C57BL/6 小鼠52 只，體重20 ～ 25 g，隨機分為4 組（n=13）：對照組（A組）、PBS 加異氟醚預(yù)處理組（B 組）、無意義小干擾RNA（small interference RNA，siRNA）加異氟醚預(yù)處理組（C 組）和HIF- 1α siRNA 加異氟醚預(yù)處理組（D 組）。氣體暴露前24 h C、D 組小鼠經(jīng)尾靜脈分別給予含有50 μg 無意義siRNA 或HIF-1α siRNA 的無RNA 酶的PBS 1 mL；A、B 組給予等體積PBS。B、C、D 組給予含1.5% 異氟醚和25%O2 的氣體持續(xù)吸入2 h，A 組僅吸入含25%O2 的氣體2 h。氣體暴露后24 h，采用Western blot 技術(shù)檢測腎臟組織中HIF-1α 和促紅細胞生成素（erythropoietin，EPO）蛋白的表達；制備腎缺血再灌注損傷，于再灌注后24 h 檢測血清肌酐（serum creatinine，SCr）和血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）水平，并觀察腎組織病理學(xué)變化。 結(jié)果 與A 組比較，B、C 組HIF-1α 和EPO蛋白表達明顯增加（P lt; 0.01），SCr 和BUN 水平以及腎小管評分明顯降低（P lt; 0.01）；D 組HIF-1α 蛋白表達及SCr、BUN水平較A 組明顯下降（P lt; 0.01）。與B、C 組比較，D 組HIF-1α 和EPO 蛋白的表達明顯下降（P lt; 0.01），SCr 和BUN 水平以及腎小管評分明顯增加（P lt; 0.01），腎組織損傷明顯加重。 結(jié)論 異氟醚延遲性預(yù)處理能明顯減輕腎缺血再灌注損傷，HIF-1α 參與調(diào)控異氟醚的保護作用。
目的 激素性股骨頭缺血性壞死（osteonecrosis of the femoral head，ONFH）防治效果不理想，探討六味地黃丸預(yù)防ONFH 的可行性及分子機制，為預(yù)防激素性O(shè)NFH 提供實驗依據(jù)。 方法 取成年健康昆明小鼠36 只，體重40 ～ 50 g，平均46 g，隨機分為3 組（n=12）：空白對照組（A 組）、馬血清/ 激素組（B 組）、馬血清/ 激素/ 六味地黃丸組（C 組）。B、C 組均2 次腹腔注射馬血清，2 次劑量分別為10 mL/kg 及5 mL/kg，間隔2 周；第2 次注射馬血清同時肌肉注射醋酸潑尼松龍45 mL/（kg·d），共5 d，制備激素性O(shè)NFH 小鼠模型。于應(yīng)用激素同時B 組灌服生理鹽水10 mL/（kg·d），C 組灌服六味地黃丸2 g/（kg·d）；A 組同時間點肌肉注射及灌服等量生理鹽水。觀察小鼠一般情況，于第1 次激素注射后2、4、8 周處死小鼠，大體觀察股骨頭情況，取雙側(cè)股骨頭及肝臟行組織學(xué)及免疫組織化學(xué)染色觀察，TUNEL 法檢測細胞凋亡情況。 結(jié)果 B、C 組分別于第2 次腹腔注射馬血清后死亡2 只及1 只小鼠，余小鼠均存活至實驗完成。3 組各時間點股骨頭外觀、形態(tài)及關(guān)節(jié)軟骨面均正常。組織學(xué)觀察示A 組各時間點肝臟及股骨頭均正常。B 組第1 次激素注射后2 周肝細胞腫脹，細胞內(nèi)可見小脂肪空泡，肝索結(jié)構(gòu)不清，肝竇變窄；股骨頭區(qū)骨小梁纖細、稀疏，部分可見斷裂；且隨時間推移，變化愈顯著。C 組各時間點肝臟及股骨頭與A 組相似。B 組股骨頭空骨陷窩率高于A、C 組（P lt; 0.01），A、C 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。免疫組織化學(xué)染色觀察，各時間點B 組與A、C 組比較，股骨頭骨保護素局部表達陽性率下降，骨保護素配體局部表達陽性率上升，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01）。細胞凋亡檢測示B 組較A、C 組骨細胞凋亡指數(shù)顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.01），A、C 組間2、4 周比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），8 周差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 六味地黃丸具有改善骨代謝、保護骨細胞、降脂等作用，可通過抑制小鼠股骨頭局部骨細胞凋亡、拮抗激素影響股骨頭內(nèi)骨保護素/ 骨保護素配體表達，起到預(yù)防早期激素性O(shè)NFH 的作用。
目的 在人工全髖關(guān)節(jié)翻修術(shù)中發(fā)現(xiàn)假體周圍大量金屬離子聚集和NF-κB 受體活化因子配體（re ceptor activator of NF-κB ligand，RANKL）表達的增加，通過觀察Co2+、Cr3+ 對小鼠成骨細胞RANKL、骨保護素（osteoprotegerin，OPG）表達的影響，探討金屬離子與假體無菌性松動關(guān)系。 方法 取濃度為1 × 105 個 /mL 體外培養(yǎng)的小鼠成骨細胞，根據(jù)培養(yǎng)基不同分兩組：實驗組采用含10 mg/L CoCl2 及150 mg/L CrCl3 溶液的培養(yǎng)基；對照組采用不含金屬離子的培養(yǎng)基。培養(yǎng)24、48 h，采用RT-PCR 和ELISA 法檢測RANKL、OPG mRNA 及蛋白表達。 結(jié) 果 RT-PCR 檢測示培養(yǎng)24、48 h 兩組均見RANKL、OPG mRNA 的表達，實驗組表達量較對照組高，以RANKL 增加顯著，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；培養(yǎng)24、48 h，實驗組RANKL/OPG mRNA 的比值分別為0.860、1.232，較對照組0.695、0.688 明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。ELISA 檢測顯示，實驗組RANKL、OPG 蛋白表達量較對照組明顯增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）。 結(jié)論 Co2+、Cr3+ 可刺激小鼠成骨細胞RANKL、OPG mRNA 的表達并促進其蛋白的分泌，以RANKL 增加顯著，從而促進破骨細胞的形成與活化以及假體無菌性松動的發(fā)生。
目的 不同強度和持續(xù)時間下FGF 信號的生物效應(yīng)可能不同，探討FGF 信號持續(xù)增強對體外培養(yǎng)小鼠骺板生長的影響及可能機制。 方法 取胚胎期15 d 的C57BL/6J 小鼠掌骨建立體外培養(yǎng)模型，分為3 組（各40 只掌骨）。對照組加入0.1% DMSO，bFGF 組加入100 μg/L bFGF 和0.1% DMSO，PD98059 組加入100 μg/L bFGF 和50μmol/ L PD98059（含0.1% DMSO）。培養(yǎng)6 d 后用Calcein 溶液對掌骨的鈣化組織染色，測量其總長度（total length，TL）和鈣化組織長度（ossified tissue length，OSL）的增加百分率。培養(yǎng)7 d 提取骺板軟骨細胞的RNA，實時熒光定量PCR 儀檢測Ⅱ型膠原（collagen type Ⅱ，Col Ⅱ）、Col Ⅹ、Ihh（Indian hedgehog）基因表達的變化。 結(jié) 果 胚胎小鼠的掌骨在體外培養(yǎng)條件下繼續(xù)生長發(fā)育。培養(yǎng)6 d 后，bFGF 組掌骨TL 增加百分率與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05），OSL增加百分率顯著小于對照組（P lt; 0.05）；PD98059 組掌骨TL 增加百分率和OSL 增加百分率與對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05），但均較bFGF 組顯著提高（P lt; 0.05）。培養(yǎng)7 d，bFGF 組Ihh、Col Ⅱ和Col Ⅹ基因表達的相對含量均較對照組顯著降低（P lt; 0.05）；PD98059 組Col Ⅱ和Col Ⅹ基因表達的相對含量與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05），但顯著高于bFGF 組（P lt; 0.05），Ihh 基因表達的相對含量均顯著高于對照組和bFGF 組（P lt; 0.05）。 結(jié)論 持續(xù)的FGF 信號增強可能通過Ihh 下調(diào)來影響Col Ⅱ和Col Ⅹ表達，使體外培養(yǎng)的骺板生長遲滯。細胞外信號調(diào)節(jié)激酶信號通路可能在上述機制中發(fā)揮重要作用。
目的 采用簡單貼壁培養(yǎng)方法誘導(dǎo)胚胎干細胞（embryonic stem cell，ESC）分化為內(nèi)皮樣細胞，為組織工程血管及細胞替代治療提供新的種子細胞。 方法 小鼠ESC 株SV129 按2 × 104 個/cm2 密度傳代培養(yǎng)，采用ESC培養(yǎng)基添加1 000 U/mL 白血病抑制因子（leukaemia inhibitory factor，LIF）維持其未分化狀態(tài)。撤除LIF，ESC 懸浮培養(yǎng)形成擬胚體（embryoid body，EB），將培養(yǎng)第4 天的EB 置于含VEGF 的培養(yǎng)基中貼壁培養(yǎng)，誘導(dǎo)分化。采用免疫組織化學(xué)染色、流式細胞儀分析、DiI 標(biāo)記的乙?；兔芏戎鞍祝?，1-dioctadecyl-3，3，3，3-tetramethylindocarbocyanine-labeled acetylated low density lipoprotein，DiI-Ac-LDL）攝取實驗以及透射電鏡檢查鑒定分化細胞的性質(zhì)。 結(jié)果 分化產(chǎn)生的內(nèi)皮樣細胞具有內(nèi)皮細胞形態(tài)特征，能攝取DiI-Ac-LDL。ESC 誘導(dǎo)分化培養(yǎng)產(chǎn)生的第15 代細胞免疫組織化學(xué)染色呈Flk-1 和CD31 陽性；流式細胞儀檢測ESC 傳至9 代后CD31 陽性細胞gt; 90%；透射電鏡可見懷布爾- 帕拉德體及內(nèi)皮細胞間緊密連接。 結(jié)論 采用簡單貼壁培養(yǎng)的方法，單獨使用VEGF 即可誘導(dǎo)ESC 分化為內(nèi)皮樣細胞。誘導(dǎo)培養(yǎng)方法操作簡便，經(jīng)濟實用，可為組織工程血管及細胞替代治療提供所需內(nèi)皮樣細胞
目的 探討熱休克蛋白60（heat shock protein 60，HSP60）對小鼠移植皮片成活的影響及其機制。 方 法 選用60 只C57BL/6（H-2b）小鼠為受體，45 只BALB/C（H-2d）小鼠、15 只CBA/N（H-2k）為供體，均為8 ～ 12周齡近交系雌性小鼠。受體小鼠剪下1 cm × 1 cm 全層皮膚，干紗布清創(chuàng)，即為植床；隨機分為4 組，每組15 只。A 組：無菌取供體BALB/C（H-2d）小鼠背部1 cm × 1 cm 全層皮片，刮去皮下組織后移植至受體小鼠背部；B 組：受體小鼠背部皮下注射0.1 mL 不完全弗氏佐劑（imcompleted Freund’s adjuvant，IFA），2 周后行BALB/C（H-2d）小鼠皮膚移植；C 組：受體小鼠背部皮下注射經(jīng)0.1 mL IFA 乳化后的50 μg HSP60，2 周后行BALB/C（H-2d）小鼠皮膚移植；D 組：受體小鼠背部皮下注射經(jīng)0.1 mL IFA 乳化后的50 μg HSP60，2 周后行CBA/N（H-2k）小鼠皮膚移植。B、C、D 組供體皮膚移植方法同A 組。術(shù)后觀察移植皮片成活時間；移植術(shù)后7、25 d 行單向混合淋巴細胞反應(yīng)及混合淋巴細胞培養(yǎng)上清液細胞因子檢測；術(shù)后7 d 行遲發(fā)型超敏反應(yīng)測定。 結(jié)果 A、B、C、D 組移植皮片成活時間分別為（12.4 ± 0.5）、（11.6 ± 0.8）、（29.3 ± 2.6）及（27.6 ± 2.1） d；A、B 組與C、D 組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），A、B 組間及C、D 組間比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。皮膚移植術(shù)后7 d，A、B、C、D 組混合淋巴細胞反應(yīng)每分鐘放射脈沖數(shù)（counts of per minute impulse，cmp）值分別為12 836 ± 1 357、11 876 ± 1 265、6 581 ± 573 及6 843 ± 612；A、B 組與C、D 組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05）；A、B 組間及C、D 組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）；術(shù)后25 d，各組cpm 值分別為13 286 ± 1 498、12 960 ± 1 376、11 936 ± 1 265 及12 374 ± 1 269，各組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。皮膚移植術(shù)后7 d，C、D 組混合淋巴細胞培養(yǎng)上清液IL-10 高于A、B 組，IL-2、干擾素γ（interferon γ，IFN-γ）低于A、B 組（P lt; 0.05），A、B 組間及C、D 組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05） ；術(shù)后25 d，各組IL-2、IL-10 及IFN-γ 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。皮膚移植術(shù)后7 d，A、B、C、D組受體小鼠對供體小鼠脾細胞的遲發(fā)型超敏反應(yīng)為（0.84 ± 0.09 ）、（0.81 ± 0.07）、（0.43 ± 0.05）及（0.46 ± 0.03）mm；A、B組與C、D 組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P lt; 0.05），A、B 組間及C、D 組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P gt; 0.05）。 結(jié)論 HSP60對免疫耐受的誘導(dǎo)和維持有一定作用。
目的 觀察米諾環(huán)素對視網(wǎng)膜色素變性（RP）的rd小鼠［C3H/HeN (Pde6brd-/rd-)］RP過程的影響。方法 40只新生rd小鼠隨機分為10組，5組為實驗組，5組為對照組，每組4只小鼠。實驗組，出生后每日腹腔注射米諾環(huán)素22.5 mg/kg；對照組，出生后每日腹腔注射生理鹽水10 ml/kg。在出生后1、7、14、21、28 d各處死一組實驗組和對照組小鼠，取眼球做組織學(xué)觀察并行凋亡細胞檢測，并對兩組視網(wǎng)膜光感受器細胞數(shù)、外核層厚度以及凋亡細胞數(shù)目進行統(tǒng)計分析。結(jié)果 （1）rd小鼠出生后7 d光感受器細胞開始凋亡，14 d達高峰，28 d光感受器細胞完全消失；（2）出生后7 d實驗組光感受器細胞數(shù)目和外核層厚度與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；（3）出生后14、21 d實驗組光感受器細胞數(shù)目和外核層厚度多于對照組相應(yīng)時間點，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（14 d：t=-3.03、P=0.016，t=-4.469，P=0.004；21d: t=-8.782、P＜0.001，t=-3.497、P=0.004）；（4）出生后7、14 d實驗組外核層凋亡細胞數(shù)目少于對照組相應(yīng)時間點，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=-3.497、P=0.004，t=-8.782、P＜0.0001）。結(jié)論 米諾環(huán)素在rd小鼠RP早期可以延緩光感受器細胞丟失，但不能完全阻止RP的發(fā)生。
目的觀察抗血管內(nèi)皮生長因子單克隆抗體Bevacizumab眼內(nèi)注射對非肥胖糖尿病小鼠視網(wǎng)膜微血管增生的預(yù)防作用。方法選取30只非肥胖糖尿病小鼠，左眼為實驗眼，右眼為對照眼。實驗眼眼內(nèi)注入1 mu;l Bevacizumab(25 mg/1 ml)溶液， 對照眼眼內(nèi)注入等量生理鹽水。分別在注射后1周，1、2個月時隨機各選取10只鼠，取出雙側(cè)眼球，行視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞超微結(jié)構(gòu)觀察以及視網(wǎng)膜CD34和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）免疫組織化學(xué)測定，計算機圖像分析對比兩組間陽性染色密度的差異。結(jié)果 VEGF和CD34陽性表達均為棕黃色著色，CD34的染色定位在血管內(nèi)皮細胞上。在注射后1周、1個月時，兩組間VEGF表達比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=21.6, t=13.5; P＜0.01 ）；注射后2個月時，兩組間VEGF表達比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.9, P＞0.05）。注射后1周時，兩組間CD34表達比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.3, P＞0.05）；注射后1、2個月時，兩組間CD34表達比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t= 3.2, P＜0.01; t=2.7, P＜0.05）。注射后各時間段，視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細胞的微觀結(jié)構(gòu)都未發(fā)生明顯改變。結(jié)論 Bevacizumab眼內(nèi)注射可預(yù)防非肥胖糖尿病小鼠視網(wǎng)膜微血管的異常增生。 （中華眼底病雜志，2008，24：180-183）
目的 構(gòu)建在視網(wǎng)膜組織特異性表達的人血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）165基因。 方法 用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法從BLAB/C鼠全基因組擴增能在視網(wǎng)膜組織特異性表達的rho啟動子，經(jīng)限制性內(nèi)切酶純化后克隆于質(zhì)粒pcDNA3.1+-VEGF165中，建立重組質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165，通過限制性內(nèi)切酶酶切分析及PCR鑒定篩選出正確重組質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165,由jetPEI介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人視網(wǎng)膜色素上皮細胞和人臍靜脈內(nèi)皮細胞，并通過免疫組織化學(xué)染色以及繪制細胞生長曲線檢測在人視網(wǎng)膜色素上皮細胞和人臍靜脈內(nèi)皮細胞中VEGF蛋白的表達。 結(jié)果 在人視網(wǎng)膜色素上皮細胞中，重組質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165比質(zhì)粒pcDNA3.1+-rho-VEGF165的VEGF蛋白表達強，在人臍靜脈內(nèi)皮細胞，兩者的表達量無明顯差別。 結(jié)論 pcDNA3.1+-rho-VEGF165載體的構(gòu)建為進一步研究VEGF在視網(wǎng)膜新生血管形成中的致病機理提供基礎(chǔ)材料，并為進一步建立視網(wǎng)膜特異性表達VEGF轉(zhuǎn)基因鼠模型建立了基礎(chǔ)。 (中華眼底病雜志,2005,21:106-109)
目的研究晶狀體特異性表達的制瘤素（OSM）誘發(fā)視網(wǎng)膜變性的信號途徑。方法將去除部分序列的小鼠OSM cDNA（661堿基對）連接到αA晶狀體蛋白（αA-crystallin）啟動子上，然后用顯微注射的方法將其導(dǎo)入單細胞胚胎內(nèi)，建立OSM轉(zhuǎn)基因鼠。采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）檢測非轉(zhuǎn)基因鼠和OSM轉(zhuǎn)基因鼠視網(wǎng)膜中OSM受體gp130/OSMRβ mRNA的表達，兔抗磷酸化的轉(zhuǎn)錄信號傳遞和激活因子-3（STAT-3）抗體檢測磷酸化的STAT-3蛋白質(zhì)的表達，鼠抗細胞色素C抗體檢測視網(wǎng)膜中細胞色素C的分布。結(jié)果在新生的非轉(zhuǎn)基因鼠視網(wǎng)膜中有g(shù)p130/OSMRβ mRNA的表達。胚胎期17.5 d，OSM轉(zhuǎn)基因鼠視網(wǎng)膜細胞核中有大量的磷酸化的STAT-3的積聚。出生后1 d，OSM轉(zhuǎn)基因鼠視網(wǎng)膜中有大量細胞色素C分布。結(jié)論晶狀體特異性表達的OSM可能作用于視網(wǎng)膜中g(shù)p130/OSMRβ受體，激活STAT-3，引起細胞色素C從線粒體中大量釋放，誘發(fā)廣泛的視網(wǎng)膜變性。(中華眼底病雜志,2005,21:167-169)