觀察TGF-β1 中和抗體對TGF-β 誘導的肌腱細胞膠原產生及術后粘連形成的影響，探討生物學調節(jié)在肌腱粘連防治中的作用。 方法 取6 只成年新西蘭大白兔12 條屈趾肌腱分離肌腱成纖維細胞、腱外膜細胞和腱內膜細胞，將細胞隨機分成2 組，實驗組加入1 ng/mL TGF-β 后，再加入不同濃度TGF-β1 中和抗體，對照組不添加任何試劑，培養(yǎng)3 d 后ELISA 測定Col Ⅰ的產生。取84 只兔行中趾屈趾肌腱切斷吻合術，隨機分成3 組，腱鞘內分別注入生理鹽水（NS 組,n=36）、1.0 μg/mL TGF-β1 中和抗體（1.0 μg/mL TGF-β1 組，n=36）和2.0 μg/mL TGF-β1 中和抗體（2.0 μg/mLTGF-β1 組，n=12）。術后4、8 周取出肌腱行肌腱粘連檢測、生物力學測定、組織學觀察和掃描電鏡觀察。1、2、4、8 周后取出NS 組及1.0 μg/mL TGF-β1 組肌腱，原位雜交方法測定TGF-β1 和Col Ⅰ mRNA 的表達。 結果 ELISA 檢測顯示，TGF-β1 能明顯提高肌腱細胞Col Ⅰ的產生；TGF-β1 抗體能降低肌腱成纖維細胞、腱外膜細胞和腱內膜細胞Col Ⅰ的產生，且呈劑量依賴關系。術后4、8 周，NS 組屈趾肌腱滑動距離較短，模擬主動屈曲度明顯受限，與1.0 μg/mL TGF-β1 組和2.0 μg/ mL TGF-β1 組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；最大抗斷裂載荷各組間比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。掃描電鏡和組織學觀察結果顯示，術后4、8 周NS 組膠原纖維排列紊亂，1.0 μg/mL TGF-β1 組和2.0 μg/mL TGF-β1 組膠原纖維排列整齊。原位雜交結果顯示，術后各時間點1.0 μg/mL TGF-β1 組TGF-β1 mRNA和Col ⅠmRNA表達水平均低于NS組，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結論 TGF-β1 中和抗體能有效抑制TGF-β1 在肌腱損傷修復中的作用，減少粘連形成。
【摘 要】 目的 研究TGF-β1 抗體（TGF-β1 antibody，TGF-β1Ab）復合生物蛋白膠（fibrin glue，F(xiàn)G）預防鞘管區(qū)屈肌腱粘連的作用和對肌腱愈合的影響。 方法 72 只成年雄性來亨雞制備左足第3、4 趾趾深屈肌腱橫斷模型。按鞘管區(qū)給藥隨機分為4 組：A 組0.2 mL TGF-β1Ab、B 組0.2 mL FG、C 組0.2 mL TGF-β1Ab 及FG 復合液、D 組0.2 mL 生理鹽水，僅術中注入1 次。術后1、3 及8 周, 每組各取6 只雞第4 趾行大體及組織學觀察；3、8 周第3 趾行生物力學測定。 結 果 術后1 周各組肌腱粘連程度評分無明顯差異（P gt; 0.05）；3 及8 周C 組與A、B 及D 組比較差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。組織學觀察，術后3、8 周A、B 及D 組膠原纖維排列紊亂，C 組膠原纖維排列整齊。術后3 周，各組肌腱滑動距離比值分別為0.45 ± 0.05、0.40 ± 0.10、0.79 ± 0.09、0.25 ± 0.07；模擬主動屈曲度比值分別為0.61 ± 0.02、0.67 ± 0.03、0.91 ± 0.03、0.53 ± 0.04；屈曲功分別為（18.00 ± 0.77）、（17.80 ± 1.13）、（27.60 ± 1.73）、（15.60 ± 1.27）?/N。C 組3 項指標與A、B 及D 組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；各組最大抗斷裂載荷分別為（14.2 ± 1.9）、（15.2 ± 2.2）、（16.0 ± 2.2）、（14.7 ± 2.7）N，各組間差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。術后8 周，各組肌腱滑動距離比值分別為0.45 ± 0.07、0.43 ± 0.08、0.80 ± 0.09、0.29 ± 0.05；模擬主動屈曲度比值分別為0.61 ± 0.02、0.63 ± 0.03、0.92 ± 0.03、0.53 ± 0.03；屈曲功分別為 （18.30 ± 0.84）、（18.60 ± 0.80）、（27.90 ± 1.24）、（15.30 ± 0.75）?/N。C 組3 項指標與A、B 及D 組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05） ；各組最大抗斷裂載荷分別為（51.9 ± 3.0）、（51.4 ± 1.4）、（53.3 ± 1.3）、（52.3 ± 2.2）N，各組間差異均無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。 結論 TGF-β1Ab 復合FG 可以有效預防術后肌腱粘連，不影響肌腱的正常愈合。
【摘 要】 目的 探討應用TGF-β1 和IGF-1 基因轉染大鼠BMSCs 后，目的基因分泌情況及向軟骨細胞的分化效果，為構建新型的組織工程軟骨種子細胞提供思路。 方法 6 周齡健康雄性Wistar 大鼠2 只，體重約150 g。擴增、提取質粒pcDNA3.1-IGF-1、pcDNA3.1-TGF-β1，酶切、電泳鑒定并測序。采用密度梯度離心法和貼壁分離法，分離、純化Wistar 大鼠BMSCs，倒置相差顯微鏡觀察原代和傳代BMSCs 形態(tài)學改變，免疫熒光法檢測細胞表面標志。將TGF-β1 和IGF-1 基因單獨或共轉染第3 代BMSCs，按轉染情況分為5 組：未轉染組（A 組）、轉染空載體組（B 組）、轉染TGF-β1 組（C 組）、轉染IGF-1 組（D 組）、TGF-β1 與 IGF-1 共轉染組（E 組）。對轉染后細胞進行篩選，MTT 法測定篩選后細胞的增殖活性，RTPCR和Western blot 法檢測篩選后細胞的表達。 結果 電泳顯示IGF-1 和TGF-β1 兩目的基因條帶，基因測序與Gene-Bank cDNA序列相符。大鼠BMSCs 原代細胞接種24 h 后可見少量貼壁突起細胞，4、5 d 開始形成典型的BMSCs 簇狀增生，9、10 d 細胞生長即可達80% ～ 90% 融合；傳代后細胞形態(tài)較均一。免疫熒光法檢測BMSCs 的CD29、CD44 呈陽性反應，CD34、CD45 呈陰性反應。轉染24 h 后有少量細胞死亡，篩選3 周后細胞克隆形成，至第4 周細胞可傳代，多數(shù)細胞變成多邊形，部分細胞邊界不清，呈圓形，核偏位，核周顆粒明顯。MTT 法測定A、B、C、D、E 組細胞在490 nm 波長處的吸光度（A ）值，分別為0.432 ± 0.038、0.428 ± 0.041、0.664 ± 0.086、0.655 ± 0.045 和0.833 ± 0.103。A、B 組與C、D、E 組間差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.01），但A、B 組以及C、D、E 組間差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。RT-PCR 和Western blot 檢測目的基因和蛋白的表達量，TGF-β1 表達以C 組最多，分別為0.925 0 ± 0.022 0、124.341 7 ± 2.982 0，E 組次之，分別為0.771 7 ±0.012 0、101.766 7 ± 1.241 0（P lt; 0.01）；IGF-1 表達以E 組最多，分別為1.020 0 ± 0.026 0、128.171 7 ± 9.152 0, D 組次之，分別為0.465 0 ± 0.042 0、111.045 0 ± 6.248 0（P lt; 0.01）；II 型膠原表達以E 組最多，分別為0.980 0 ± 0.034 0、120.355 0 ±12.550 0，C 組次之，分別為0.720 0 ± 0.026 0、72.246 7 ± 7.364 0（P lt; 0.01）。 結論 通過TGF-β1 和IGF-1 基因共同轉染BMSCs 修復軟骨缺損是一個較有前景的發(fā)展方向，對組織工程軟骨應用于臨床具有重要意義。
目的 研究CoCl2 對體外培養(yǎng)的鼠下頜骨成骨細胞的作用，觀察缺氧條件對成骨細胞VEGF 及TGF-β1 表達的影響，為臨床牽張成骨技術的分子生物學機制研究提供理論依據(jù)。 方法 取新生24 h 內Wistar 大鼠下頜骨，改良酶消化法培養(yǎng)和純化成骨細胞，采用HE 染色、ALP 組織化學染色、Ⅰ型膠原免疫組織化學、鈣結節(jié)染色行細胞形態(tài)學及組織學鑒定，并繪制生長曲線。取第3 代最佳生長狀態(tài)的鼠下頜骨成骨細胞，用150 μmol/L CoCl2 處理（實驗組），設正常狀態(tài)下培養(yǎng)為對照組，分別于培養(yǎng)后0、3、6、9、12、24 h，采用免疫熒光技術檢測VEGF 及TGF-β1 表達。 結 果 HE染色示成骨細胞形態(tài)多樣，呈三角形、多角形、圓形及鱗片形等不規(guī)則形態(tài)，突起長短不一向外伸展，胞核清晰可見；胞漿豐富，呈粉紅色，胞核藍紫色，有時可見2 個細胞核，密集處細胞形態(tài)不明顯，分界模糊，僅見大圓核細胞。ALP 組織化學染色示細胞胞質呈黑色顆粒，細胞核輪廓不清，細胞密集區(qū)可見大量陽性細胞。Ⅰ型膠原免疫組織化學染色示實驗組陽性細胞均勻可見，胞漿呈棕黃色，胞核周圍尤為明顯，空白對照組細胞未見棕黃色顆粒。鈣結節(jié)染色示成骨細胞于蓋玻片上培養(yǎng)15 d 后，細胞聚集成不透明區(qū)域，呈結節(jié)樣；茜素紅染色后，有橙紅色著色。培養(yǎng)各時間點對照組細胞激光共聚焦顯微鏡下可見較弱的VEGF 表達熒光；實驗組細胞隨缺氧時間延長，VEGF 表達熒光強度值增加，于術后9 h 達高峰，隨后降至正常水平。培養(yǎng)各時間點激光共聚焦顯微鏡下可見兩組細胞均有TGF-β1 表達熒光，對照組各時間點熒光強度值均略高于VEGF 對照組；實驗組TGF-β1 表達在缺氧3 h 短期成倍增加，隨缺氧時間延長表達逐漸降低。 結論 經新生大鼠下頜骨培養(yǎng)的成骨細胞性狀穩(wěn)定；適當缺氧可誘導成骨細胞VEGF 和TGF-β1表達增強。
目的：對TGF-β1的G-800A，C-509T，T869C和G915C多態(tài)性位點與IgA腎病及其臨床表現(xiàn)之間的相關性進行了分析。方法：納入119例經腎活檢證實為IgA腎病的患者和116例健康正常成人作為對照組。采用多聚酶鏈式反應-限制片段長度多態(tài)性分析和多聚酶鏈式反應-擴增受阻突變體系方法測定TGF-β1的G-800A，C-509T，T869C和G915C多態(tài)性位點的基因型，分析其與IgA腎病發(fā)病以及臨床表現(xiàn)的相關性。結果：研究對象中G-800A和G+915C這兩個位點沒有多態(tài)性。IgAN患者C-509T位點的等位基因型分布與正常對照具有顯著性差異（Ｐ＜0.05），且IgAN患者TT純合子的頻率顯著高于對照組（33% vs 20%,Ｐ=0.02）。C869T位點等位基因的分布無顯著性差異。C-509T和C869T位點等位基因分布和患者臨床表現(xiàn)無明顯的相關性。結論：TGF-β1基因C-509T位點的T等位基因攜帶可能與IgA腎病的發(fā)病易感性具有相關性。
目的 檢測TGF-β1及p27在原發(fā)性膽囊癌中的表達，研究其蛋白產物在原發(fā)性膽囊癌發(fā)生、發(fā)展過程中的表達特點及相互關系。方法 應用免疫組化SP法檢測36例原發(fā)性膽囊癌中TGF-β1及p27的表達，并以同期20例慢性膽囊炎作對照。結果 36例原發(fā)性膽囊癌組織中23例TGF-β1基因蛋白產物呈陽性表達，表達陽性率為63.9%，高于對照組的10.0%（P＜0.05）； 17例p27蛋白陽性表達，表達陽性率為47.2%，顯著低于對照組的100%（P＜0.05）。TGF-β1在有淋巴結或遠處轉移及Nevin Ⅳ～Ⅴ期患者中表達陽性率（均為79.1%）明顯高于無轉移及Nevin Ⅰ～Ⅲ期的患者（均為33.3%），P＜0.05； p27在高、中分化、無淋巴結或遠處轉移及Nevin Ⅰ～Ⅲ期的患者中表達陽性率分別為60.9%、75.0%及75.0%，明顯高于低分化、有轉移及Nevin Ⅳ～Ⅴ期患者（23.0%、33.3%及33.3%），P＜0.05。 p27與TGF-β1表達兩者呈負相關(r=-0.447 3,P＜0.05)。 TGF-β1陽性患者生存率低于TGF-β1陰性患者，差異有顯著性意義（P＜0.05）； p27陽性患者生存率高于p27陰性患者，差異有顯著性意義（P＜0.05）。結論 在原發(fā)性膽囊癌細胞中TGF-β1表達上調，p27表達下調，且在有淋巴結或遠處轉移及Nevin Ⅳ～Ⅴ期患者中更為明顯。
【摘 要】 目的 對近年TGF-β1/Smad3信號轉導通路與創(chuàng)傷后瘢痕形成的相關研究作一綜述。 方法 廣泛查閱國內外近年有關TGF-β1/Smad3信號轉導通路及與創(chuàng)傷后瘢痕形成的文獻，并進行綜述。 結果 TGF-β1是纖維化疾病的重要影響因子，通過TGF-β1/Smad3信號通路轉導產生其生物學效應。該途徑受多種因子調控并在細胞及分子水平與其他信號通路串話。該途徑參與創(chuàng)傷后早期炎性反應、創(chuàng)面愈合及后期病理性瘢痕的形成。在分子水平干預轉導途徑的各個環(huán)節(jié)，可以影響纖維化及細胞外基質沉著的進程。 結論 TGF-β1/Smad3信號轉導途徑是影響創(chuàng)傷后瘢痕形成及細胞外基質沉著的重要途徑。對該途徑進行深入研究，可為臨床促進創(chuàng)面的愈合及病理性瘢痕的防治奠定理論基礎。
目的 構建豬TGF-β1 重組慢病毒表達載體，并轉染BMSCs，為構建組織工程骨軟骨提供TGF-β1 修飾的BMSCs，作為持續(xù)、高效的種子細胞。 方法 將已獲取的目的基因TGF-β1 cDNA 包裝至慢病毒載體中，通過PCR及基因測序對陽性克隆進行鑒定，并測定病毒滴度。取2 月齡巴馬香豬（體重約15 kg）骨髓制備BMSCs，取第2 ～ 3代用于實驗。用TGF-β1 重組慢病毒載體以感染復數(shù)（multiplicity of infection， MOI）為10、50、70、100、150 分別轉染BMSCs，通過激光共聚焦顯微鏡觀察，并以Western blot 檢測不同MOI 值的轉染效果，確定最佳MOI 值。用TGF-β1 重組慢病毒載體以最佳MOI 值感染BMSCs 作為實驗組，以空載體轉染的BMSCs（空載體組）及未轉染的BMSCs（空白組）作為對照，通過RT-PCR、免疫細胞化學染色、ELISA 等方法檢測TGF-β1 基因及蛋白在BMSCs 中的表達情況，并檢測Ⅱ型膠原表達情況。 結果 經PCR 及基因測序鑒定TGF-β1 重組慢病毒表達載體構建成功，并成功轉染BMSCs，激光共聚焦顯微鏡下可觀察到強綠色熒光；Western blot 示MOI 為70 時轉染效果最佳；RT-PCR 示實驗組TGF-β1 基因的表達量明顯高于空載體組及空白組，差異有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；免疫細胞化學染色示實驗組TGF-β1 蛋白及Ⅱ型膠原呈陽性表達，而空載體組及空白組呈弱陽性或陰性表達；ELISA 示實驗組TGF-β1 蛋白至轉染后21 d 仍有較高表達。 結論 TGF-β1 重組慢病毒表達載體可成功轉染BMSCs，TGF-β1 蛋白可長期、穩(wěn)定表達，促使BMSCs 向成軟骨細胞方向分化。
目的 富血小板血漿（platelet-rich plasma，PRP）可分泌TGF-β1、PDGF、VEGF 和IGF-1 等多種生長因子，在創(chuàng)傷愈合過程中具有促進細胞增殖，膠原合成、分泌以及炎性趨化的作用。通過觀察PRP 對兔肌腱愈合的影響，探討其作用機制，為臨床組織工程肌腱的應用提供實驗依據(jù)。 方法 取健康成年新西蘭大白兔40 只，雌雄不限，體重2.5 ～ 3.0 kg，于兔耳中心動脈取血，采用Landesberg 等的二次離心法制備PRP；對全血及PRP 行血小板計數(shù)。將兔右后肢跟腱橫行切斷制備跟腱斷裂模型，隨機分為實驗組及對照組，每組20 只。實驗組：于跟腱切斷后即刻將0.5 mL PRP 涂抹于跟腱兩斷端后縫合；對照組：直接縫合跟腱斷端。術后觀察實驗動物一般情況，于術后1、2、4、6 周兩組各處死5 只兔，取跟腱標本行大體觀察、組織學及免疫組織化學觀察，并進行成纖維細胞計數(shù)、膠原纖維含量及TGF-β1 表達水平檢測。 結 果 兔PRP 中血小板計數(shù)約為全血的4.03 倍。實驗動物均存活至實驗完成，切口愈合良好。隨觀察時間延長兩組肌腱均愈合，對照組肌腱吻合處纖維包裹較實驗組明顯。組織學觀察示術后1、2、4 周兩組成纖維細胞計數(shù)比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）；術后6 周兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P gt; 0.05）。兩組各時間點膠原纖維含量比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。免疫組織化學染色示，與對照組相比，實驗組TGF-β1 表達水平于術后1、2 周顯著上調，4、6 周下降，峰值于2 周出現(xiàn)；各時間點組間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P lt; 0.05）。 結論 PRP 可促進兔損傷肌腱的修復，改善其愈合質量，其機制可能與PRP 使肌腱中TGF-β1 的表達提前達峰值有關。
目的 TGF-β1 對骨關節(jié)炎（osteoarthritis，OA）關節(jié)軟骨起保護作用，探討OA 中基質金屬蛋白酶 9（matrix metalloproteinase 9，MMP-9）、TGF-β1 mRNA 和蛋白表達的相關性，為臨床治療OA 尋找有效的干預靶點提供理論依據(jù)。 方法 取自愿捐贈的關節(jié)軟骨及滑膜標本，其中OA 患者60 例（實驗組），外傷截肢、交叉韌帶斷裂、盤狀軟骨損傷與半月板損傷患者20 例（正常對照組）。行HE 染色觀察關節(jié)軟骨與滑膜的病理組織學改變，免疫組織化學染色觀測MMP-9 及TGF-β1 蛋白表達，原位雜交技術檢測MMP-9 及TGF-β1 mRNA 表達；并進行相關性分析。 結果 HE染色顯示實驗組關節(jié)軟骨細胞固縮、壞死、排列紊亂，細胞外基質斷裂，關節(jié)滑膜細胞肥大增生、淋巴細胞和單核細胞浸潤，多數(shù)小血管增生；正常對照組軟骨細胞排列整齊、基質染色均勻，滑膜組織無慢性炎癥表現(xiàn)、無明顯增生。兩組均可見MMP-9、TGF-β1 mRNA 和蛋白陽性表達，陽性細胞包括軟骨細胞、滑膜襯里層細胞及滑膜下層的血管內皮細胞、成纖維細胞、炎性浸潤細胞等。實驗組MMP-9 及TGF-β1 mRNA 和蛋白表達均高于正常對照組（P lt; 0.01）。實驗組MMP-9mRNA 與蛋白表達成正相關（r=0.924，P=0.000），TGF-β1 mRNA 及蛋白表達亦成正相關（r=0.941，P=0.000）；實驗組MMP-9 及TGF-β1 蛋白表達成負相關（r= — 0.762，P=0.000），MMP-9 mRNA 及TGF-β1 mRNA 表達成負相關（r= ?0.681，P=0.000）。 結論 OA 中TGF-β1 的高表達下調了關節(jié)軟骨與滑膜中MMP-9 的表達，對OA 關節(jié)軟骨起保護作用，從而延緩OA 進展。